蛋白分析FAQ汇总

• • 为什么western blot有一步操作要测定组织中的蛋白质浓度?

  测定组织中的蛋白浓度主要有以下作用： 1.确定样品的相对蛋白质含量： 测定组织中的蛋白质浓度可以帮助确定样品中的相对蛋白质含量。在Western blot实验中，我们通常会将不同样品进行比较，例如对照组和实验组。通过测定组织中的蛋白质浓度，我们可以确定加载到凝胶中的蛋白质量，从而确保在We

• • WB取材时，组织块用无酶水洗了一下，对后续蛋白实验有影响吗？

  无酶水是一种无酶活性的缓冲液，通常用于洗涤组织块或细胞，以去除可能存在的外源性蛋白质、细胞外基质和其他污染物。无酶水的使用可以减少后续蛋白质实验中的非特异性背景信号，并提高实验的特异性和准确性。 在一般情况下，用无酶水洗涤组织块不会对后续的蛋白实验产生明显的影响。洗涤组织块的目的是去除可能

• • 跑WB来检验小鼠脂肪肝在打某种抗体后是否减轻，应该跑哪几个蛋白?

  当我们想要通过WB来检验小鼠脂肪肝在打某种抗体后是否减轻时，可以检测以下与脂肪肝相关的蛋白： 1.脂肪代谢相关蛋白： 脂肪肝是由于脂肪代谢紊乱导致的，因此可以检测一些与脂肪代谢相关的蛋白，如脂肪酸合成酶（Fatty Acid Synthase，FAS）、脂肪酸氧化酶（Fatty Acid

• • 做免疫荧光染色和WB条带，不同蛋白的一抗有的用单克隆抗体，有的用多克隆抗体，这符合规范吗？

  使用单克隆还是多克隆抗体并不是问题，而是一个实验设计的选择。不同的实验目的和背景下，选择不同类型的抗体是合理的。关键是你需要确保所使用的抗体是经过验证的，并且在你的实验条件下可以特异性地检测到目标蛋白。 实验中使用单克隆或多克隆抗体的考量： 1.如果你研究的蛋白存在不同的同种型或翻译后修饰

• • Western实验hif-1a蛋白怎么才能敷出来？

  当进行 Western blot 实验时，敷出目标蛋白（如 HIF-1α）需要经过以下步骤： 1.细胞培养和处理： 培养细胞：选择适当的细胞系，如人类细胞系（HEK293、HeLa等）或小鼠细胞系（NIH/3T3等），并在合适的培养基中培养细胞。 处理细胞：根据实验设计，处理细胞以诱导或

• • 大分子量（500kda）蛋白做westernblot怎么做呢？

  处理大分子量（例如500 kDa）的蛋白进行Western Blot实验时，可能需要调整一些实验参数以确保蛋白能够被有效地分离和检测。如下所述： 1. 凝胶的选择: 使用较低浓度的聚丙烯酰胺凝胶（例如4-8%）可以更好地分离大分子量的蛋白。 2. 电泳条件: 使用低电压运行凝胶。这有助于

• • 请问如何制备磷酸质谱的样品呢

  磷酸化蛋白的样品制备对于后续的质谱分析是至关重要的，其大致步骤如下： 1. 蛋白提取: （1）使用适合的缓冲液从细胞或组织中提取总蛋白。 （2）为防止蛋白酶的活性，可加入蛋白酶抑制剂。 （3）为防止磷酸化位点在提取过程中丧失，使用磷酸酯酶抑制剂是很重要的。 2. 蛋白纯化和浓缩: （1）

• • 你好，有没有甲基化核磁分析方法

  蛋白质甲基化是一种常见的蛋白质翻译后修饰，对于调控蛋白质的功能、稳定性和互作等方面都有着重要的影响。NMR可以为甲基化位点的鉴定、甲基化动态和蛋白质的甲基化状态提供详细信息。利用NMR技术分析蛋白质甲基化的大致步骤如下： 1.样品制备： 选择合适的甲基化酶和供体，如SAM（S-腺苷甲硫氨酸

• • 蛋白组学分析中差异蛋白互相作用网络图的分析，可以说明什么问题呢？

  在蛋白组学分析中，差异蛋白互相作用网络图的分析可以帮助我们理解蛋白质之间的相互作用关系，揭示生物体内的生物学过程和疾病发生机制。通过分析差异蛋白互相作用网络图，我们可以得到以下信息： 1.蛋白质相互作用网络的拓扑结构： 差异蛋白互相作用网络图可以展示蛋白质之间的相互作用关系，包括直接的物理

• • 如何鉴定一个蛋白质是二聚体（有相同亚基的那种）？

  确认一个蛋白质是由相同亚基组成的二聚体（同源二聚体）可以通过多种方法： 一、质谱分析（Mass Spectrometry） 1.原理： 质谱分析可以精确地测量蛋白质或多肽的分子质量。 2.操作： 在解离条件下进行质谱分析，以确认单个亚基的质量。在非解离条件下进行质谱分析可以测量整个蛋白