如何定量分析免疫组化和western blot 的结果,求具体步骤

一、免疫组化定量分析:




1.图片获取:

使用显微镜拍摄处理后的组织切片，并确保所有图片的拍摄条件（如曝光时间、光源亮度等）相同。




2.图片分析:

使用图像分析软件（如ImageJ）打开图像。




3.设置阈值:

根据背景和染色的强度设置一个阈值，使染色区域可以被区分。




4.测量:

测量阈值以上的区域的面积和强度，得到每个区域的平均强度值。




5.正常化:

使用对照组数据正常化结果，或与其他标记物进行比较。




二、Western Blot定量分析:




1.获得图像:

使用胶片或数字成像系统捕获Blot图像。




2.选择合适的软件:

如ImageJ、Quantity One等进行图像分析。




3.背景减去:

选择一个没有条带的区域作为背景，使用软件减去背景。




4.条带定量:

使用软件工具选择每个条带，并测量其灰度值。




5.正常化:

通常使用内部标准如β-Actin或GAPDH等来正常化所感兴趣的蛋白条带的强度。




6.数据分析:

使用图形或统计软件进行后续数据分析。

 

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