双向凝胶电泳为什么能一次性分离上千种蛋白质？

双向凝胶电泳（2D-PAGE）是一种高效的蛋白质分离技术，它能够在一次实验中分离上千种蛋白质。其能力主要归因于它依次使用了两种不同的分离机制：




1.第一维度：等电聚焦（IEF）

• 原理：蛋白质根据其等电点（pI，蛋白质不带电荷的pH值）被分离。在一定的pH梯度下，蛋白质会迁移到它们的等电点位置，即蛋白质的净电荷为零的地方。
• 结果：在这个阶段，蛋白质主要是根据它们的等电点被分离的，每种蛋白质迁移到其特定的pH位置。



2.第二维度：SDS-PAGE

• 原理：在第一维分离后，蛋白质样品被再次分离，这次是基于蛋白质的分子量。SDS（十二烷基硫酸钠）是一种表面活性剂，能够将蛋白质变性并赋予它们负电荷，使蛋白质根据大小（分子量）进行迁移。
• 结果：在这个阶段，蛋白质进一步被根据它们的分子量分离。



通过组合这两种分离机制（等电点和分子量），双向凝胶电泳能够在二维平面上分离蛋白质。每种蛋白质根据它们的等电点和分子量被分配到凝胶上的一个特定位置。这使得分析复杂的蛋白质样品成为可能，因为每个蛋白质点在二维凝胶上占据一个唯一的位置。与一维蛋白质电泳相比，这大大增加了分离和识别不同蛋白质的能力。




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