蛋白分析FAQ汇总
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• 做结构蛋白全长过程中构建质粒时发现其保守区域的氨基酸序列有M,可以把M突变掉吗?突变掉会不会影响原蛋白的结构和功能?
当考虑改变蛋白质的氨基酸序列时,一般需要考虑以下几个因素: 1.功能和结构的影响: 每个氨基酸在蛋白质中都有其特定的作用和位置。突变掉某个氨基酸可能会影响蛋白的三维结构和功能。例如,如果M位于一个结构的关键位置,或者参与某些功能性的互作,那么突变它可能会导致蛋白的功能丧失或结构不稳定。
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• 想咨询一下在计算圆二色谱纵坐标Δε (M-1,cm-1) 单位是什么,以及M的含义
在化学和物理学中,圆二色谱(Circular Dichroism, CD)是一种测量分子对左旋和右旋圆偏振光吸收差异的技术。通常,CD谱的纵坐标是Δε,其单位通常是M^−1^cm−1。 在这个单位中: M^−1 指的是摩尔逆,即摩尔浓度的倒数。这是因为CD谱通常是在一定浓度的溶液中测量的
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• 蛋白的质谱定性可以用什么软件呢?如果鉴定出来的蛋白量太少可能会和什么有关呢
在蛋白质质谱分析中,有多种软件工具可用于蛋白质的定性分析,以下是一些常用的软件: 1.Mascot: 是一款广泛使用的商业软件,由Matrix Science开发。它可以匹配来自多种质谱技术的数据,并与多个蛋白质数据库进行比较。 2.SEQUEST: 最早由John Yates III开
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O糖修饰,也称为O-糖基化,是一种在蛋白质的酮基氨基酸上发生的糖类修饰。与N-糖基化不同,O-糖基化的糖类结构和连结方式更为多样。分析O-糖基化修饰的实验步骤通常较为复杂。以下是一个基本的实验流程,具体的步骤和方法可能会根据实验需求和条件进行调整: 蛋白质提取: 使用适当的提取缓冲液从
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在研究蛋白质的SUMO化(Small Ubiquitin-like Modifier,小泛素样修饰)修饰时,不一定总是需要切除SUMO分子: 1.如果目的是检测蛋白质是否被SUMO修饰: 使用Western Blot实验来检测蛋白质的SUMO化状态时,不需要切除SUMO分子,因为SUMO
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• 我们要做western blot 实验,主要做白色脂肪,怎样进行蛋白定量呢?
首先,你需要将白色脂肪组织进行适当的处理和裂解以提取蛋白质。一种常见的选择是RIPA缓冲液,它可以有效地破坏细胞膜并释放细胞内的蛋白。同时,不要忘记添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂,以防蛋白被降解。 提取蛋白后,接下来就是蛋白质的定量。BCA蛋白定量试剂盒是一个不错的选择。你只需取适量的蛋白样品和
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• 检测蛋白表达量多少用电泳不就可以了吗,为什么还要做免疫印迹?
这个问题,涉及到生物学实验中的两种常见技术:凝胶电泳和免疫印迹(Western Blot)。虽然这两种技术都可以用来检测蛋白质,但它们的应用和优势是不同的。 一、蛋白质电泳: 1.目的: 主要用于分析蛋白质的大小或质量,并能够分离不同大小的蛋白质。 2.结果: 可以直观地看到样品中蛋白
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双向凝胶电泳(2D-PAGE)是一种高效的蛋白质分离技术,它能够在一次实验中分离上千种蛋白质。其能力主要归因于它依次使用了两种不同的分离机制: 1.第一维度:等电聚焦(IEF) 原理:蛋白质根据其等电点(pI,蛋白质不带电荷的pH值)被分离。在一定的pH梯度下,蛋白质会迁移到它们的等电点
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蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是一种在没有变性条件下分离蛋白质的电泳技术。与SDS-PAGE不同,Native PAGE保留了蛋白质的天然三维结构和生物活性。 一、原理 Native-PAGE 的原理是利用电场使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中移动。蛋白质的迁移速度取决于
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• 如果一个样品中有多个未知蛋白,但凝胶电泳中未使用SDS,请你预测可能发生什么结果,为什么?
如果一个样品中有多个未知蛋白,并且在凝胶电泳中未使用SDS,那么这些蛋白质可能会根据其原有的电荷、形状和大小在凝胶中分离,而不仅仅是根据其分子量。这可能会使得结果的解析变得更加复杂,因为我们不能简单地根据蛋白质在凝胶中的位置推断其分子量。 百泰派克生物科技--生物制品表征,多组学生物质谱检
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