蛋白分析FAQ汇总

• • 蛋白质相互作用的方法怎么选择？

  选择蛋白质相互作用的实验方法时，应考虑以下几个因素： 1. 实验的目的： 筛选未知互作蛋白：如果是筛选未知的互作蛋白，可以使用酵母双杂交（Y2H）或质谱方法。 验证特定互作：如果是验证特定的蛋白质互作，可以使用免疫共沉淀（Co-IP）或生物层析（BLI）。 2. 样品类型： 体内实

• • 研究蛋白质相互作用的哪些方法会产生假阴性？

  研究蛋白质相互作用时，酵母双杂交、免疫共沉淀、表面等离子共振和质谱分析等方法可能都会产生假阴性结果。以下是一些常见的方法和可能导致假阴性结果的原因： 1、酵母双杂交（Y2H）： 酵母双杂交是一种常用的蛋白质相互作用研究方法。然而，由于技术限制，酵母双杂交可能会产生假阴性结果。可能的原因包括

• • 蛋白免疫印迹实验可以检测两种或两种以上的蛋白质吗？为什么？

  蛋白免疫印迹实验可以同时检测多个蛋白质的存在和表达水平。这是因为在实验中，可以使用多个特异性抗体来检测不同的蛋白质。每个特异性抗体都能与目标蛋白质结合形成免疫复合物，并产生相应的信号。通过使用不同的抗体，可以同时检测多个蛋白质。 百泰派克生物科技——生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务

• • 外膜蛋白ompa。十二肽库，怎么用pull down 验证互作啊?

  通过pull down技术验证外膜蛋白OMPA与十二肽库中其他蛋白之间的互作，需要先使用OMPA抗体磁珠复合物将OMPA蛋白从细胞裂解液中捕获，然后通过洗涤和Elution步骤分离和收集特异性结合的蛋白质。最后，使用蛋白质分离和检测技术进行分析，以确定OMPA与十二肽库中的哪些蛋白质发生了互

• • Pull down实验，HIS标签蛋白与his柱结合弱怎么改善？有没有封闭缓冲液使蛋白与his柱封闭？

  当HIS标签蛋白与HIS柱结合弱时，可以采取以下方法来改善结合效果： 1.优化结合条件： 调整结合缓冲液的pH值、离子强度和温度等参数，以优化蛋白与柱子之间的相互作用。可以尝试不同的缓冲液体系，如Tris-HCl、HEPES或PBS等，以找到最适合的结合条件。 2.增加结合时间： 延长蛋

• • 330kd的超大分子量蛋白怎么做western blot？

  对于超大分子量（如330kDa）的蛋白进行Western Blot分析时，可能需要调整一些实验条件以优化分离和转移效果： 1、样品处理： 由于超大分子量蛋白在凝胶中迁移速度较慢，建议在样品处理过程中使用较高的还原剂浓度（如DTT或β-巯基乙醇）来完全还原蛋白。 使用较高的蛋白负载量，以增

• • western blot蛋白跑了好久都没有动怎么办?

  当 Western blot 蛋白质分析出现没有结果或者没有明显的带的情况时，可能是实验过程中出现了一些问题： 1、电源问题： 确保电源已正确连接并且正在工作。 检查电源设置，确保电压和电流设置正确 2、电极方向问题： 确保电极的方向正确。错误的电极方向会导致蛋白质无法正确迁移。

• • 当细胞内某个蛋白或酶与小分子抑制剂结合了，通过western blot是否检测到？抗体还能否与之结合？

  Western blot通过特异性抗体与目标蛋白结合来检测蛋白的存在与表达水平，当细胞内某个蛋白或酶与小分子抑制剂结合后，通过Western blot是可以检测到的。特异性抗体仍然可以与蛋白质的其他区域结合，形成抗原-抗体复合物，并通过化学发光或染色方法进行检测。这些方法可以产生可视化的信号

• • 检验蛋白质的办法有很多，什么时候用Westen blot，什么时候用ELISE呢?是有什么规则嘛？

  Western Blot和ELISA是两种常用的蛋白质检测方法，它们各自有自己的优点和适用场景。 1、Western blot（蛋白质印迹）： 适用情况：Western blot通常用于检测目标蛋白质的存在、相对表达水平以及特定修饰状态，如磷酸化、甲基化等。它可以提供关于目标蛋白质的分子

• • 为什么western blot 大分子蛋白条带呈波浪状？

  Western Blot实验中，大分子蛋白条带呈波浪状（或称为“微笑效应”）是一个常见的问题，这可能是由以下几个因素引起的： 1. 电泳条件： 电压设置：如果运行电泳的电压过高，可能会导致蛋白质迁移过快，从而产生波浪状的条带。 电泳时间：电泳时间过长或过短都可能影响蛋白质的迁移