蛋白分析FAQ汇总

• • 酶解消化蛋白，买来的酶规格是100units，怎么计算确定要加多少呢？

  要确定使用100单位（units）酶的用量，您需要首先了解所需的酶与蛋白的比例，然后根据蛋白的量来计算酶的用量。以下是步骤：   1.确定蛋白的总量： 例如，如果您有1毫克（mg）蛋白。   2.计算所需酶的量： 对于 Asp-N：如果推荐的比例是50:1，那么需要的Asp-N的量为 1

• • 酶解消化蛋白，单独使用及联合使用Asp-N或Glu-C酶的使用方法和用量？之前一直用的胰蛋白酶，按照样品:酶30:1来加

  一、单独使用Asp-N或Glu-C酶 1.Asp-N: 用量: 推荐蛋白与酶的比例为50:1。 条件: pH 8.0左右，37°C下酶解，通常进行overnight酶解。   2.Glu-C: 用量: 推荐蛋白与酶的比例为20:1到30:1。 条件: 最佳pH 7.8，37°C下进行over

• • sec柱子上端有乙醇是不是表示柱子漏了,对实验有什么影响吗

  SEC 柱子上端有乙醇可能是由于柱子密封不良或接头松动导致的泄漏。这会对实验产生以下影响：   1.样品丢失： 样品和流动相可能会泄漏，导致样品量减少或无法正确分析。   2.污染： 乙醇或其他泄漏的液体可能会污染样品或周围的环境，影响后续实验的准确性。   3.峰形异常： 泄漏可能导致压力

• • 测序和质谱的区别？一般测序是DNA序列，质谱是蛋白，这样质谱能检测到的范围不应该更窄吗？

  测序与质谱是两种不同的生物分子分析技术，各自具有独特的应用范围和特点。   1.测序： 主要用于分析核酸序列（DNA或RNA），可以提供非常详细的基因组或转录组信息。通过测序，可以获取基因的完整序列信息，揭示基因突变、基因表达的差异等。这使其在基因组学、遗传学等领域非常重要。   2. 质谱

• • 蛋白二硫键鉴定和定量分析的结果怎么看？

  蛋白二硫键的鉴定和定量分析主要依靠质谱技术。以下是如何解读这些分析结果的关键步骤：   1.鉴定二硫键： 在质谱数据中查找具有特定质量增加的肽段。二硫键形成时，两个半胱氨酸残基通过共价键连接，导致肽段在质谱中的表现为特定的质量增加。 分析肽段的质谱碎片图，确定半胱氨酸残基之间的连接。在MS

• • DARTS具体的实验步骤?是考染后送质谱还是已经找到靶蛋白了用这个做验证?,考染之后发现好多蛋白都有变化,那送质谱应该怎么送呢?

  DARTS（Drug Affinity Responsive Target Stability）是一种用来鉴定药物靶蛋白的技术。具体实验步骤如下：   1.样品准备： 将待测药物与细胞裂解液或组织提取物中的蛋白混合，允许药物与可能的靶蛋白形成复合物。   2.蛋白质消化： 处理混合物一段时间

• • 使用一个dss交联剂跑ip和多聚化蛋白wb的方法

  使用DSS (二硫基亚砜) 交联剂进行免疫共沉淀 (IP) 和多聚化蛋白的Western Blot (WB) 分析的方法如下：   1. 交联 准备样品：从细胞或组织中提取蛋白质，并调整蛋白浓度。 添加DSS：向蛋白样品中加入DSS交联剂。DSS是一种常用的可逆交联剂，能够在蛋白质的赖氨酸

• • 糖基化修饰位点结果怎么看?

  糖基化修饰位点的结果通常是通过质谱分析（Mass Spectrometry, MS）获得的，主要关注以下几点：   1.糖基化位点的位置： 通过质谱数据，可以确定蛋白质链上具体哪些氨基酸残基发生了糖基化修饰。这通常涉及查找带有特定质量增加的肽段。   2. 糖链结构： 分析糖链的类型和结构，

• • 相对丰度怎么计算？

  质谱实验中的相对丰度通常指的是同位素的相对丰度，即某一同位素在自然界中存在的比例。相对丰度可以通过质谱仪等仪器进行测量。下面为您提供具体的计算方法：收集样本：收集含有需要测量的同位素的样本。离子化：将样品中的分子转化为离子，通常使用质谱仪中的离子源完成这一步骤。质谱分析：将产生的离子引入质谱

• • 超滤可以纯化蛋白吗？

  是的，超滤可以用于纯化蛋白。这种方法通过使用半透膜来分离不同分子量的物质，有效去除低分子量的杂质，从而集中和纯化蛋白质。