蛋白分析FAQ汇总

• • 忘加loading煮沸后加loading煮5分钟冷冻，下次稀释多少倍合适？稀释后需补加loading并煮沸吗？

  1.建议稀释2-5倍。具体稀释比例取决于你的样品浓度和实验要求，通常需要稀释至总蛋白浓度的1-2 µg/µL，以确保电泳结果的准确性和可重复性。 2.稀释后需要补加1X加载缓冲液（loading buffer）。补加loading buffer可以确保样品在电泳时能够正常迁移，并且溴酚蓝染料

• • 进行Western blot实验，稀释煮沸的蛋白原液是用什么稀释?

  进行Western blot实验时，如果需要稀释煮沸的蛋白原液，通常使用以下两种缓冲液之一进行稀释：   1. 蛋白提取缓冲液 使用与最初提取蛋白时相同的提取缓冲液（如RIPA缓冲液、PBS、Tris缓冲液等）进行稀释。有助于保持蛋白质的稳定性。   2. 1X加载缓冲液（Loading B

• • 用DMSO将DSS粉末配制成的溶液浓度虽然是5mM，但加到蛋白体积里面，它不是又被蛋白液体稀释了？那浓度就不是5mM了吧？

  是的，如果直接添加5 mM的DSS母液会被蛋白溶液稀释，无法达到最终5 mM的浓度。理由如下：浓度计算步骤：1.设定变量：2.公式：代入已知值：公式变形：该等式不成立，只有当加入体积都为0时，才能保持5 mM的浓度。如果你想达到在蛋白体积中DSS的浓度为5 mM，只有先使得配制的DSS母液大

• • 蛋白交联试验用DMSO把dss粉末配成浓度5mM的液体，现在蛋白体积为180ul如何稀释母液使得它加入蛋白体积的最终浓度为5mM

  在这种情况下，你不需要对5 mM的DSS母液进行额外的稀释。因为你想要在180 µL的蛋白溶液中达到最终浓度为5 mM的DSS，只需直接添加足够的DSS母液到蛋白溶液中即可。具体步骤如下：   1.计算DSS添加量： 由于母液的DSS浓度已经是5 mM，与你想要的最终浓度相同，直接添加少量母

• • 酶解消化蛋白，买来的酶规格是100units，怎么计算确定要加多少呢？

  要确定使用100单位（units）酶的用量，您需要首先了解所需的酶与蛋白的比例，然后根据蛋白的量来计算酶的用量。以下是步骤：   1.确定蛋白的总量： 例如，如果您有1毫克（mg）蛋白。   2.计算所需酶的量： 对于 Asp-N：如果推荐的比例是50:1，那么需要的Asp-N的量为 1

• • 酶解消化蛋白，单独使用及联合使用Asp-N或Glu-C酶的使用方法和用量？之前一直用的胰蛋白酶，按照样品:酶30:1来加

  一、单独使用Asp-N或Glu-C酶 1.Asp-N: 用量: 推荐蛋白与酶的比例为50:1。 条件: pH 8.0左右，37°C下酶解，通常进行overnight酶解。   2.Glu-C: 用量: 推荐蛋白与酶的比例为20:1到30:1。 条件: 最佳pH 7.8，37°C下进行over

• • sec柱子上端有乙醇是不是表示柱子漏了,对实验有什么影响吗

  SEC 柱子上端有乙醇可能是由于柱子密封不良或接头松动导致的泄漏。这会对实验产生以下影响：   1.样品丢失： 样品和流动相可能会泄漏，导致样品量减少或无法正确分析。   2.污染： 乙醇或其他泄漏的液体可能会污染样品或周围的环境，影响后续实验的准确性。   3.峰形异常： 泄漏可能导致压力

• • 测序和质谱的区别？一般测序是DNA序列，质谱是蛋白，这样质谱能检测到的范围不应该更窄吗？

  测序与质谱是两种不同的生物分子分析技术，各自具有独特的应用范围和特点。   1.测序： 主要用于分析核酸序列（DNA或RNA），可以提供非常详细的基因组或转录组信息。通过测序，可以获取基因的完整序列信息，揭示基因突变、基因表达的差异等。这使其在基因组学、遗传学等领域非常重要。   2. 质谱

• • 蛋白二硫键鉴定和定量分析的结果怎么看？

  蛋白二硫键的鉴定和定量分析主要依靠质谱技术。以下是如何解读这些分析结果的关键步骤：   1.鉴定二硫键： 在质谱数据中查找具有特定质量增加的肽段。二硫键形成时，两个半胱氨酸残基通过共价键连接，导致肽段在质谱中的表现为特定的质量增加。 分析肽段的质谱碎片图，确定半胱氨酸残基之间的连接。在MS

• • DARTS具体的实验步骤?是考染后送质谱还是已经找到靶蛋白了用这个做验证?,考染之后发现好多蛋白都有变化,那送质谱应该怎么送呢?

  DARTS（Drug Affinity Responsive Target Stability）是一种用来鉴定药物靶蛋白的技术。具体实验步骤如下：   1.样品准备： 将待测药物与细胞裂解液或组织提取物中的蛋白混合，允许药物与可能的靶蛋白形成复合物。   2.蛋白质消化： 处理混合物一段时间