tmt标记定量蛋白质组学缺点中的比率压缩是怎么产生的,这个特点会有什么影响呢?为什么tmt只能进行相对定量,不能进行绝对定量?
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缺乏内标:TMT标记定量通常没有绝对定量的内标或校准曲线,不能直接测量蛋白质的绝对丰度。
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仪器响应不一致性:不同蛋白质或肽段的质谱响应因子(即质谱仪对不同肽段的响应强度)可能存在差异,这种差异性使得无法直接推断出蛋白质的绝对含量。
一、比率压缩的产生及其影响
在TMT标记定量蛋白质组学中,比率压缩是一个常见问题。比率压缩主要是由于在质谱分析过程中,多个不同的肽段同时离子化并进入质谱检测器,导致同一m/z值下的离子信号被多个不同肽段的同位素标签共享。因为TMT标签的离子丰度在不同样品间会略有不同,而这些微小的差异在混合分析时往往被平均或削弱,最终导致TMT标签之间的信号比值被压缩。
比率压缩的结果是,样品间的差异被低估,特别是在那些实际差异较大的样品之间,信号的比例可能会被压缩到接近1:1。这种现象不仅影响了实验的精确度,还可能掩盖了生物学上有意义的变化,导致对蛋白质表达水平的误判。
为了解决这个问题,研究者们通常会使用一些校正方法,例如:比率压缩校正算法、基于标准化蛋白质的校正方法等,以减小比率压缩对定量结果的影响。
二、TMT只能进行相对定量,不能进行绝对定量的原因
TMT是一种同位素标记方法,通过在肽段上标记不同的同位素标签,实现多重样品的相对定量。它的工作原理依赖于不同样品之间标记肽段信号强度的比较,而不是测量某个肽段或蛋白质的绝对丰度。
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