TMT/iTRAQ/MultiNotch定量蛋白组学分析

    iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo Fisher公司研发的多肽体外标记定量技术。这两种技术采用多个(2-10)稳定同位素标签,特异性标记多肽的氨基基团进行串联质谱分析,能够同时比较多达10种不同样本中蛋白质的相对含量,可用于研究不同病理条件下或者不同发育阶段的组织样品中蛋白质表达水平的差异。

    对于可以传代的细胞样品来说,我们可以采取SILAC的方法完成对于细胞蛋白质组的标记过程,但是许多其他研究体系,比如组织样品以及不能进行传代培养的细胞来说,需要其他的标记方法来完成定量蛋白组学分析。TMT, iTRAQ等基于体外(in vitro)标记的定量方法应运而生。

    iTRAQ标签包括三部分,如下图:
    1. 报告基团(reporter group):指示蛋白样品丰度水平。
    2. 平衡基团(balance group):平衡报告基团的质量差,使等重标签重量一致,保证标记的同一肽段m/z相同。
    3. 肽反应基团(amine-specific reactive group):能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接,从而标记上肽段。
    iTRAQ和TMT标签结构图

    iTRAQ和TMT标签结构图


    来自不同样品的同一肽段经TMT/iTRAQ试剂标记后具有相同的质量数,并在一级质谱检测(MS1)中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行碎裂后,在二级质谱检测(MS2)中,不同的报告基团被释放,它们各自的质谱峰的信号强弱,代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。TMT/iTRAQ定量蛋白组学研究因其测定精准度高适应样品种类多,目前已有很广泛的应用。百泰派克在传统的TMT/iTRAQ分析技术的基础上,提供TMT/iTRAQ/MultiNotch MS分析技术,使用三级碎片报告离子进行定量,可进一步提高TMT/iTRAQ定量蛋白组学分析的精度,进一步提高定量准确性。

    百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台,Orbitrap Fusio Lumos质谱平台结合Nano-LC,推出基于TMT/iTRAQ/MultiNotch MS的定量蛋白组分析服务技术包裹,您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的蛋白寄给我们,我们会负责项目后续所有事宜,包括蛋白酶切、肽段标价、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。

    iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析实验流程

    iTRAQ 8-plex定量蛋白组学分析流程

    iTRAQ 8-plex定量蛋白组学分析流程


    iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析技术特点

    • 高通量定量蛋白分析:可以同时分析10个样品;适合大量临床样本,多对照组大规模实验分析,发现新的生物标记物
    • 体外标记,适用于分析组织、细胞、血液等多种样品
    • 质谱分析灵敏度高,可检测较低丰度蛋白,大范围比较蛋白相对丰度
    • 可与富集磷酸化等修饰肽段的方法联用,更准确研究翻译后修饰变化

    iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析样品要求

    TMT-iTRAQ-MultiNotch定量蛋白组学分析样品要求

    TMT-iTRAQ-MultiNotch定量蛋白组学分析样品要求


    注意:样品运输请使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。

    中/英文项目报告

    在技术报告中,百泰派克生物科技会为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:

    1. 实验步骤(中英文)
    2. 相关的质谱参数(中英文)
    3. 质谱图片
    4. 原始数据
    5. 蛋白差异水平分析
    6. 生物信息学分析

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