蛋白分析FAQ汇总
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O-糖基化Western Blot（WB）抗体检测的基本步骤如下： 1.样本准备： 收集并制备含有目标蛋白的细胞或组织样本。使用适当的裂解缓冲液裂解样本，然后通过离心去除不可溶物。 2.蛋白浓度测定： 使用BCA蛋白测定试剂盒或类似方法，测定样本中的蛋白浓度。 3.SDS-PAGE电泳
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• 在制备免疫复合物时，蛋白总量推荐用多少呢？加入的抗体量，蛋白+抗体去孵育，还是需要加点温和裂解液去孵育呢？
在制备免疫复合物时，蛋白总量通常建议在几百微克到几毫克之间，具体取决于目标蛋白的丰度和抗体的亲和力。加入的抗体量一般为1-10微克，具体根据抗体的效率和特异性来调整。将蛋白和抗体混合后，通常需要在温和裂解液中孵育，以保持蛋白质的天然构象和相互作用。孵育时间和条件（如温度）也需要根据具体的实验
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• 做SUMO内源性的Coip，样品组织放太久了对实验有影响吗？提取蛋白时加了NEM了
如果样品组织存放时间过长，尤其是在非最佳条件下（如未适当冷冻或未添加蛋白酶抑制剂），蛋白质可能会发生降解或发生不可逆的改变，导致实验的蛋白质量量和修饰状态不准确。即使在加入了NEM的情况下，这些改变仍可能发生，因为NEM主要是用来抑制蛋白酶的活性，而不是防止所有的蛋白质降解形式。因此，尽管加
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BS3交联的步骤通常包括以下几个关键环节： 1.样品准备: 首先准备好要交联的蛋白质样品。确保蛋白质浓度适宜，并且样品处于合适的缓冲液中。 2.BS3溶液配置： 将BS3溶解在适当的溶剂中（例如DMSO或水），以达到所需的浓度。 3.加入BS3至样品： 将BS3溶液加入到蛋白质样品中，
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蛋白质糖基化是指蛋白质上添加糖基的过程，这个过程会导致蛋白质分子量的增加，但具体增加多少取决于以下因素： 1.糖基的类型和数量： 不同类型的糖基（如葡萄糖、半乳糖、神经酰胺等）具有不同的分子量，且一个蛋白质上可以添加不止一个糖基。 2.糖链的长度和分支： 糖链可以是单一的糖基，也可以是长
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N-连接和O-连接糖基化是糖蛋白生物合成中的两种主要类型，它们在多种生物过程中起着重要作用。以下是它们之间的主要区别： 一、N-连接糖基化（N-linked glycosylation）： 1.这种类型的糖基化发生在天冬酰胺（Asparagine, Asn）上。 2.它涉及到一个特定的
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b离子和y离子是蛋白/肽段在串联质谱分析中观察到的两种常见的断裂离子类型，在碰撞诱导解离（CID）或其他碎片化方法下断裂时产生。 b离子是通过肽链的氨基末端（N-末端）形成的。当肽链中的骨架（即肽键）断裂时，如果带有电荷的部分包括了肽的N-末端，那么生成的离子就被称为b离子。b离子系列有助
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N-糖基化（N-glycosylation）的寡糖链通常连接在天冬氨酸残基的侧链氨基上，该氨基与特定的序列模式相邻，即寡糖转移酶识别的序列模式“NXS/T”（其中X可以是任何氨基酸，除了脯氨酸）。这种糖基化过程是细胞内生物合成过程的一部分，对蛋白质的稳定性、折叠和功能
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蛋白质的糖基化位点是指蛋白质上的特定氨基酸残基与糖分子共价结合的位置。蛋白质的糖基化位点分析是一个复杂的过程，通常涉及以下几个步骤： 1.样本准备： 首先，需要从生物样本中提取蛋白质。这可能涉及使用离心分离、凝胶电泳或其他蛋白质纯化技术。 2.酶解： 使用特定的酶（如胰蛋白酶）处理蛋白质
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在提取和分离蛋白质类药物时，避免蛋白质失活是一个关键的挑战。以下是一些重要的策略和注意事项： 1.低温操作： 蛋白质在低温下更稳定。因此，在提取和分离过程中应尽可能在低温条件下进行操作，比如使用冰浴或冷藏设备。 2.缓冲液的选择： 使用适当的缓冲液能够维持蛋白质的结构和功能。缓冲液的pH
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