蛋白分析FAQ汇总

• • sumo融合蛋白为什么在镍柱上酶切切不掉标签？

  这种情况可能由几个因素引起： 1.酶的活性不足： 使用的酶可能活性不高，或者已经失活。酶的活性可以受到多种因素影响，包括储存条件、温度、pH值等。建议检查酶的质量和储存条件，或者尝试使用新鲜的酶。 2.酶的浓度不足： 可能酶的添加量不足，无法充分与蛋白接触或者达到足够的酶切效率。增加酶的

• • ip 实验求助！input组目的蛋白为双条带，ip组拉下来是单条带！

  在免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）实验中，如果在input（输入）组中观察到目标蛋白为双条带，而在IP组中只拉下单条带，可能是由于： 1、蛋白修饰： 在Input组中，目的蛋白可能存在不同的翻译后修饰形式（如磷酸化、糖基化等），导致电泳迁移速度不同，形成双条带。而

• • sevga法脱蛋白，可以用抽滤除去蛋白沉淀吗？

  可以的，Sevag法通常用于在含有蛋白质的液体样品中去除蛋白。这种方法涉及到使用氯仿和异丙醇的混合溶剂，通过分解蛋白质来清除它们。而DNA或RNA等核酸则留在水相中。在此过程中，样品中的蛋白质与氯仿和异丙醇反应，形成沉淀，然后可以通过抽滤或离心分离出来，从而清除样品中的蛋白质。 百泰派克生

• • 用质谱检测氨基酸的浓度为什么需要很高

  使用质谱（Mass Spectrometry, MS）检测氨基酸需要较高的浓度主要是因为： 1.检测限制： 质谱仪的检测灵敏度限制了它能检测到的最低浓度。对于一些设备，尤其是旧设备或分辨率较低的设备，可能需要更高的样品浓度才能获得可靠的信号。 2.信号强度： 氨基酸的信号可能相对较弱，尤

• • p62蛋白两条带可以用嘛？是p62蛋白被修饰了吗？

  当Western Blot分析中观察到p62蛋白出现两条带时，这可能表示p62蛋白发生了一种或多种形式的翻译后修饰。 第一种情况：P2蛋白发生了翻译后修饰 p62蛋白可能经历了磷酸化、泛素化、糖基化等翻译后修饰，这些修饰可以改变蛋白质的迁移率，导致电泳时出现多个条带。例如，磷酸化会使蛋白质

• • 转膜以后没封闭，pvdf膜存4℃冰箱前没晾干有啥后果？

  将PVDF膜（聚偏氟乙烯）转膜后直接放入4℃的冰箱而不进行晾干，可能会带来几个潜在的问题： 1.水分残留： 如果膜上有水分残留，低温条件可能导致水分凝结，这可能会影响膜的物理结构和性能。 2.膜结构改变： PVDF膜在潮湿条件下可能发生结构上的改变，这可能会影响其后续的应

• • 做WB时，小kd的条带跑出来是倒u型弯曲，稍大些kd的是正常的，为什么呢，是胶没配好，还是电泳夹子是漏的？

  在蛋白质凝胶电泳（Western Blot, WB）中，如果小分子量（小kd）的蛋白条带出现倒U型弯曲，而较大分子量（大kd）的蛋白则正常，这可能是由几个因素引起的： 1.凝胶问题： 如果凝胶制备不均匀或者在聚合过程中发生了问题，可能会导致蛋白质在电泳过程中不均匀迁移。比如，凝胶中的交联密

• • 如何确定参与蛋白质相互作用的氨基酸序列

  确定参与蛋白质相互作用的氨基酸序列是一个复杂的过程，通常涉及以下步骤： 1.蛋白质相互作用鉴定： 使用技术如酵母双杂交、共免疫沉淀（Co-IP）、质谱分析等来初步鉴定相互作用的蛋白质。 这可以提供有关哪些蛋白质可能相互作用的信息，但并不直接提供相互作用的精确氨基酸序列。一旦确定了可能相互

• • 请教蛋白质谱鉴定数据分析问题

  蛋白质质谱分析可以提供多种类型的数据，主要包括： 1.肽段质量/荷比（m/z）数据： 这是质谱分析中最基本的数据，表示了肽段的质量与电荷比。通过这些数据，可以推断肽段的分子质量。 2.肽段片段离子数据： 在串联质谱（MS/MS）分析中，肽段被进一步分解成更小的片段，产生独特的片段谱图。这

• • 哪些氨基酸可能是泛素化修饰位点

  泛素化是一种蛋白质翻译后修饰过程，涉及将泛素（一种小的调节性蛋白）连接到底物蛋白上。泛素化主要作用于几种氨基酸残基： 1.赖氨酸（Lysine, K）： 赖氨酸的ε-氨基是泛素化最常见的靶点。泛素通过其C末端的甘氨酸与底物蛋白的赖氨酸残基形成共价键。 2.半胱氨酸（Cys