蛋白分析FAQ汇总

质谱分析分三个主要步骤完成。质谱分析的第一步是电离，即将热量施加到样品分子上以将其转化为气体。然后使用离子源将气体转化为离子而将样品分子电离。第二步是根据质量对离子进行分类，分两个阶段完成——加速和偏转。离子的加速速度取决于其质量，较轻的分子比较重的分子移动得快得多。离子束射入磁场，然后

M代表质量，Z代表离子的电荷数。在质量分析中，从分子中取出一个电子以产生单电荷离子。如果除去两个电子，则产生双电荷离子。被除去的电子数就是电荷数（对于正离子）。m/z表示质量除以电荷数，质谱中的横轴以m/z为单位表示。由于GCMS的z几乎总是1，因此m/z值通常被认为是质量。相关服务:蛋白质

质量分析中使用的质量数定义如下。由6个质子和6个中子组成的碳12同位素的质量数定义为整数12。碳12质量的1/12的部分被定义为质量单位。使用该单位测量时，氢原子的质量数为1.007825，氮原子的质量数为14.003074，氧原子的质量数为15.9949146。有机化合物由碳、氢、氮、氧和

S/N表示信号强度S除以基线噪声宽度N。换言之，S/N值越大，相对于噪声信号强度越好，灵敏度越高。相关服务:蛋白质质谱鉴定

电泳后，肉眼无法直接观察到蛋白质分离，需要后续的染色技术。考马斯亮蓝染色和银染色是常规检测和定量电泳分离的蛋白质的常用方法。经过固定-染色-脱色等简单处理后，可以清楚地观察到蛋白质的分布。随着高灵敏度蛋白质分析方法和蛋白质鉴定技术的改进，新的染色方法如荧光标记、同位素标记技术都大大提高了灵敏

通常在每次实验前制备新鲜的SDS-PAGE凝胶。然而，凝胶也可以在4°C的清水中储存约一周。如果凝胶在染色后不能及时拍照，则需要将其置于水中，以防止凝胶干燥和收缩。建议尽快拍摄染色结果。如果凝胶长时间浸泡在水中，条带会分散。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离

PAGE是丙烯酰胺的聚合物。双丙烯酰胺作为交联剂，将聚丙烯酰胺链连接起来，这最终形成作为分子网的聚丙烯酰胺链的三维网络。由于双丙烯酰胺只是连接丙烯酰胺聚合物链的交联剂，因此双丙烯酰胺：丙烯酰胺在凝胶中的比例约为1∶35。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离

用于估计实验样品中多肽的大小。蛋白质分子量参照物的每个条带对应于单个分子量。通过目视观察实验样品中的多肽与分子量参照物条带相比迁移了多远，可以估计其分子量。蛋白质分子量参照物的其他次要用途包括：在凝胶电泳期间，视觉确认特定大小的多肽在电泳过程中可能迁移了多远；确认蛋白质在随后的操作（如蛋

虽然有些凝胶在SDS-PAGE之后染色，但有些没有。未染色的凝胶会用于下游分析程序。在这种情况下，可以避免染色凝胶，因为它可能会阻碍后续实验步骤。一种非常常见的蛋白质分析技术，其中进行了SDS-PAGE但凝胶未染色，而用于其他下游步骤是蛋白质印迹（Western blot）。相关服务:基于

除完整蛋白质分子量测定以外的所有服务，样品可以以凝胶或液体形式提交。 a.用于完整蛋白质分子量分析的样品应为液体形式（即在缓冲液中）。缓冲液不应含有任何洗涤剂。凝胶样品不适合，因为无法有效地从凝胶中提取完整的蛋白质。 b.用于其他服务的凝胶条带应切成约1毫米的立方体。 c.用于所有其他服务的

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