蛋白分析FAQ汇总

• • 如何清洗受污染的色谱柱？

  使用具有更多离子的更强流动相以相反的方向清洗色谱柱。对于反相混合模式色谱柱，使用 60-70% 的乙腈和 0.3% 的硫酸或磷酸。或者使用50-100mM甲酸铵缓冲液（pH3）和60-70%的ACN。对于 HILIC 混合模式色谱柱，使用较少的乙腈 (20-30%)清洗 ，但添加剂的用量与R

• • 如何制备和调整流动相的pH值？

  建议制备缓冲液的水溶液，然后使用与缓冲液相同的酸来调节pH值——甲酸用于甲酸铵，乙酸用于乙酸铵。对于更稳健的方法，请将pH值保持在所需pH值的0.05单位内。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 如果待分析化合物在甲酸或乙酸流动相中没有洗脱该怎么办？

  可以换用相对应的缓冲液。盐会产生更多离子，可用于增加流动相的强度。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • LC色谱柱上可以注入多少样品而仍能避免谱带展宽？

  进样量以及最佳流速受到色谱柱尺寸的限制。理想情况下，如果样品与流动相使用相同的溶剂，则大致体积应为：30-100mm色谱柱的样品体积1-3ul；50-150mm色谱柱的样品体积2-12ul；50-250mm色谱柱的样品体积8-40ul。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 蛋白纯化——分析色谱和制备色谱的区别是什么？

  分析色谱法用于确定样品中分析物的存在以及可能的浓度。 例如通过尺寸排阻色谱法估计抗体样品中的聚集体/二聚体含量。制备色谱用于纯化足够量的物质以供进一步使用，例如用于功能或结构研究。相关服务:蛋白质纯度和均一性表征

• • 蛋白纯化——上样前用于样品过滤的推荐过滤器孔径是多少？

  对于色谱前的样品制备，应根据色谱介质的珠粒大小选择过滤器孔径。90µm或更大的色谱介质粒度—1µm过滤器孔径；30或34µm色谱介质粒度—0.45µm过滤器孔径；3 µm、10 µm、15 µm的色谱介质粒度或需要超净样品或无菌过滤时—0.22µm过滤器孔径；相关服务:蛋白质纯度和均一性表征

• • 蛋白纯化——我感兴趣的蛋白质在纯化过程中“消失”了，我该怎么办？

  这种情况可能是由于：1、蛋白质已被蛋白酶降解——向样品和缓冲液中添加蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解消化；或通过 Benzamidine Sepharose 4 Fast Flow 等介质运行样品以去除胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。2、样品制备过程中蛋白质吸附至过滤器——使用不同膜类型的过滤器。 再生纤

• • 抗体纯化——我不知道蛋白A或蛋白G是否最适合我的抗体纯化。我应该怎么办？

  蛋白G是实验室规模的通用抗体捕获的首选，与蛋白A相比，蛋白G与更广泛的真核物种的IgG结合。蛋白G还与更多的IgG亚类结合。相关服务:蛋白质纯度和均一性表征

• • 抗体纯化——洗脱后如何保持抗体活性？

  由于抗体纯化中的洗脱步骤通常需要降低 pH 值，因此存在敏感抗体失去活性的风险。为防止这种情况可以用每毫升洗脱液 60 -200 µl 1 M Tris-HCl 缓冲液(pH 9.0 )d的标准准备收集管，这可以保持抗体活性，因为洗脱液的最终 pH 值将接近中性；或者在优化洗脱条件时确定保持

• • 抗体纯化——如何纯化抗体片段？

  蛋白 L 通过与免疫球蛋白轻链的相互作用结合免疫球蛋白。 它首先是从大消化链球菌的表面分离出来的，并命名为蛋白质 L 的轻链。重链的任何部分都不参与相互作用，这意味着蛋白L比蛋白A或蛋白G结合更广泛的抗体种类。Capto L 亲和色谱法培养基(树脂)可特异性地与抗体 kappa 轻链的可变区