蛋白分析FAQ汇总

• • SEC——为什么我的SEC色谱柱分辨率低？

  在尺寸排阻色谱（SEC）中，许多因素会影响分辨率，如介质的粒度、柱长和样品体积。但另一个可能不太明显的方面是液相色谱 (LC) 系统本身。重要的是尽量减少系统中的死体积，例如通过使用短而窄的管道并移除系统流路中所有不必要的组件。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • SDS-PAGE使用的材料有什么？

  电源：用于将交流电流转换为直流电流。 凝胶：这些凝胶要么在实验室中自行制备，要么从市场上购买。 电泳室：应使用适合的SDS-PAGE凝胶电泳室。 蛋白质样品：蛋白质用SDS-PAGE样品缓冲液溶解并煮沸10分钟。添加还原剂，例如二硫菌醇或2-巯基乙醇，以最大限度地减少二硫键，防止任何叔蛋白折

• • SDS-PAGE有哪些应用？

  SDS-PAGE的应用如下： 用于测量分子的分子量。 用于测量蛋白质的大小。 用于肽图分析。 用于比较不同结构的多肽组成。 用于清楚蛋白质的杂质。 用于分析多肽亚基的大小和数量。 用于分析翻译后修饰。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离

• • SDS在SDS-PAGE中有什么作用？

  SDS 可以定义为存在于SDS-PAGE样品缓冲液中的洗涤剂。SDS的功能是破坏蛋白质的二硫键，与一些还原剂一起破坏蛋白质的三级结构。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离

• • SDS在SDS-PAGE中的功能是什么？

  SDS（十二烷基硫酸钠）是一种阴离子洗涤剂，可使蛋白质展开和变性，并以负电荷包裹蛋白质。SDS被过量地添加到蛋白质中，以便覆盖蛋白质的内在电荷，并且所有蛋白质获得相似的荷质比。通过这种方式，蛋白质的迁移速率将取决于它们的大小，而不是它们的内在电荷。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离

• • 如何通过SDS-PAGE确定蛋白质的分子量？

  SDS-PAGE是确定未知蛋白质分子量的主要方法。具有已知分子量的蛋白质和未知样品同时进行电泳。染色后，根据标准蛋白的相对迁移率和分子量的对数，可以得到一条线，并利用未知样品的相对迁移率确定其分子量。在实验室中，一种与染料共价偶联的标准分子量蛋白质被用作参考，以大致指示未知蛋白质的大小。这种

• • 如何知道蛋白质 N-/O-糖基化了吗？

  虽然大多数 N- 和 O- 糖肽都可以通过肽图谱检测到，但检测N-糖基化最灵敏和最可靠的方法是用 N-糖苷酶酶解和荧光标记。RapiFluor 是一种在荧光和 MS 信号强度方面均可靠且灵敏的标记试剂。使用 2AB 或普鲁卡因胺进行荧光标记可用于分析蛋白质的 O-糖基化谱。相关服务:糖基化定

• • 如何分析蛋白质的 N-糖基化？

  当然有各种方法，但我们认为最合适的技术是酶促释放 N-糖和荧光标记。通过 HILIC 色谱分离和定量，MS/MS 鉴定。在重叠峰的情况下，峰面积与 MS 信号强度混合，为您提供每个糖结构的最准确的相对定量。相关服务:N-糖分析服务

• • 糖基化位置在哪？

  如果氨基酸序列包含共有序列 NXS/T（其中 X 是除 P 之外的任何氨基酸），则可能发生 N-糖基化。O-聚糖最容易在丝氨酸或苏氨酸残基上检测到，但它也可以连接于羟赖氨酸或羟脯氨酸。相关服务:糖基化位点分析

• • 蛋白质上有多少个糖基化位点？

  使用蛋白水解酶解物通过 LC-MS/MS 肽图谱分析最容易确定不同糖基化位点的数量。糖基化肽从序列信息和与糖结构的特征质谱片段（氧鎓离子）的相关性中被鉴定。相关服务:糖基化位点分析