蛋白分析FAQ汇总

• • 标签蛋白纯化——我需要天然的蛋白质，我能把标签撕下来吗？

  答案是肯定的，但删除标签并不总是那么简单。标签去除总是包括使用序列特异性蛋白酶。凝血因子凝血酶和因子Xa是最常用的，但你需要确保它们各自的切割序列（LVPR↓GS和IEGR↓) 不存在于目标蛋白质中。一些标签，例如谷胱甘肽-S-转移酶 (GST)-标签可以用更具体的蛋白酶去除，例如 PreS

• • 未标记蛋白质纯化——我打算对我的目标蛋白进行功能研究，但我不能引入标签来简化纯化。我该怎么办？

  如果存在与蛋白质特异性结合的配体，则可以通过单个亲和步骤纯化未标记的蛋白质。 如果无法使用亲和步骤，您可能需要使用多步骤纯化策略。多步骤纯化包括根据目标蛋白的性质选择合适的纯化技术组合。相关服务:蛋白质纯度和均一性表征

• • 未标记蛋白质纯化——未标记的好处是什么？ 标记是否纯化更困难？

  如果您对功能研究感兴趣，标签可能会带来不确定性，或者更糟的是，会改变或完全破坏目标蛋白的功能。此外，标签本身会干扰您以您想要的方式使用蛋白质的能力。当蛋白质被用作治疗剂并且您希望尽可能接近天然形式时，这一点尤为重要。相关服务:蛋白质纯度和均一性表征

• • SEC——为什么我的SEC色谱柱分辨率低？

  在尺寸排阻色谱（SEC）中，许多因素会影响分辨率，如介质的粒度、柱长和样品体积。但另一个可能不太明显的方面是液相色谱 (LC) 系统本身。重要的是尽量减少系统中的死体积，例如通过使用短而窄的管道并移除系统流路中所有不必要的组件。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • SDS-PAGE使用的材料有什么？

  电源：用于将交流电流转换为直流电流。 凝胶：这些凝胶要么在实验室中自行制备，要么从市场上购买。 电泳室：应使用适合的SDS-PAGE凝胶电泳室。 蛋白质样品：蛋白质用SDS-PAGE样品缓冲液溶解并煮沸10分钟。添加还原剂，例如二硫菌醇或2-巯基乙醇，以最大限度地减少二硫键，防止任何叔蛋白折

• • SDS-PAGE有哪些应用？

  SDS-PAGE的应用如下： 用于测量分子的分子量。 用于测量蛋白质的大小。 用于肽图分析。 用于比较不同结构的多肽组成。 用于清楚蛋白质的杂质。 用于分析多肽亚基的大小和数量。 用于分析翻译后修饰。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离

• • SDS在SDS-PAGE中有什么作用？

  SDS 可以定义为存在于SDS-PAGE样品缓冲液中的洗涤剂。SDS的功能是破坏蛋白质的二硫键，与一些还原剂一起破坏蛋白质的三级结构。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离

• • SDS在SDS-PAGE中的功能是什么？

  SDS（十二烷基硫酸钠）是一种阴离子洗涤剂，可使蛋白质展开和变性，并以负电荷包裹蛋白质。SDS被过量地添加到蛋白质中，以便覆盖蛋白质的内在电荷，并且所有蛋白质获得相似的荷质比。通过这种方式，蛋白质的迁移速率将取决于它们的大小，而不是它们的内在电荷。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离

• • 如何通过SDS-PAGE确定蛋白质的分子量？

  SDS-PAGE是确定未知蛋白质分子量的主要方法。具有已知分子量的蛋白质和未知样品同时进行电泳。染色后，根据标准蛋白的相对迁移率和分子量的对数，可以得到一条线，并利用未知样品的相对迁移率确定其分子量。在实验室中，一种与染料共价偶联的标准分子量蛋白质被用作参考，以大致指示未知蛋白质的大小。这种

• • 如何知道蛋白质 N-/O-糖基化了吗？

  虽然大多数 N- 和 O- 糖肽都可以通过肽图谱检测到，但检测N-糖基化最灵敏和最可靠的方法是用 N-糖苷酶酶解和荧光标记。RapiFluor 是一种在荧光和 MS 信号强度方面均可靠且灵敏的标记试剂。使用 2AB 或普鲁卡因胺进行荧光标记可用于分析蛋白质的 O-糖基化谱。相关服务:糖基化定