可以分享一下蛋白鉴定的数据结果及分析方法吗?如果鉴定出几十种蛋白,该以哪个值为参考得出最优结果呢?

    蛋白鉴定通常是通过质谱法,尤其是液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)来进行的。蛋白质质谱鉴定主要得到的数据有:

     

    1.肽段质量谱:

    对蛋白酶消化后的蛋白片段(肽段)进行质谱分析,得到肽段的m/z(质荷比)。

     

    2.碎片质谱:

    对选定的肽段进行进一步的碎片化,得到的子片段的m/z。

     

    3.蛋白ID及覆盖率:

    鉴定出的蛋白质的名称和它的肽段在总蛋白中的覆盖率。

     

    4.置信度分数:

    描述蛋白鉴定结果准确性的数值。

     

    通常需要进一步分析原始数据以得到直观的结果,常用数据分析方法如下:

     

    1.数据库匹配:

    使用软件(如Mascot、SEQUEST等)将实验获得的肽段质量谱和碎片质谱与已知的蛋白数据库进行比对,鉴定出可能的蛋白。

     

    2.假阳性率估计:

    使用诸如“目标-解码”(target-decoy)策略评估鉴定的假阳性率。

     

    3.定量分析:

    对不同样本中蛋白的相对或绝对含量进行分析,如通过标记方法(如iTRAQ、TMT)或非标记方法(如LFQ)。

     

    如果鉴定出几十种蛋白,你可以参考以下参数选择最优的结果:

     

    1.置信度分数:

    通常是蛋白鉴定的首要考量,高分通常意味着更可靠的鉴定。

     

    2.假阳性率:

    应控制在一个可接受的范围内,如1%。

     

    3.蛋白覆盖率:

    高的覆盖率意味着蛋白鉴定的准确性更高。

     

    4.多次重复实验的一致性:

    多次鉴定结果的重复性可以增加鉴定的可靠性。

     

    即高分、假阳性率低、覆盖率高及重复性好的数据是相对来说较优的选择。

     

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