什么是TMT?

TMT（Tandem Mass Tag）是一种用于蛋白质组学定量分析的同位素标记技术。它利用同位素标签进行蛋白质组的相对或绝对定量，从而实现多样本的同时比较和分析。TMT技术的核心是一系列同位素标签试剂，这些试剂可以与蛋白质或肽段发生共价结合，形成可在质谱仪上检测到的同位素标记产物。

一、TMT标签由三部分组成：

1.可与肽段氨基酸（通常是赖氨酸）末端结合的活性基团；

2.可在质谱仪中解离出的平衡质量调节区；

3.含有不同同位素组成的唯一质量报告区。

二、TMT实验的基本步骤如下：

1.蛋白质提取：

从不同样本中提取蛋白质。

2.蛋白质酶解：

将提取的蛋白质进行酶解，通常使用胰蛋白酶，生成肽段。

3.肽段标记：

将每个样本的肽段与不同的TMT标签进行反应，形成标记肽段。

4.样品混合：

将标记后的肽段混合在一起，形成一个混合样品。

5.肽段分离：

使用液相色谱（如高效液相色谱，HPLC）对混合样品中的肽段进行分离。

6.质谱分析：

将分离后的肽段进行质谱分析（通常是串联质谱，MS/MS），在碎片离子的质谱图中检测到TMT标签的报告离子。

7.数据处理：

通过比较不同TMT标签的报告离子强度，计算蛋白质在不同样本中的相对或绝对丰度。

三、TMT技术的优势：

1.高灵敏度：

可以检测低丰度的蛋白质；

2.分离能力强：

可以分离酸/碱蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白、不溶性蛋白等；应用范围广：可以鉴定任何类型的蛋白质，包括膜蛋白质、核蛋白质和胞外蛋白质；

3.高通量：

可以同时分析10个样品，特别适合对采用多种处理方法或多种处理时间的样品进行差异蛋白质分析。

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