绝对定量的标准品如何制作？
绝对定量AQUA（Absolute QUAntification）方法是一种基于质谱的蛋白质定量技术，它通过使用同位素标记的合成肽段作为内部标准来实现蛋白质的准确定量。在绝对定量实验中，标准品的制备至关重要，因为它为实验提供了一个已知浓度的参考物质。以下是制备标准品的一般步骤：
1.选择代表性肽段：
选定一个具有良好的可离子化效率、唯一性和较低化学修饰可能性的代表性肽段，以准确反映目标蛋白质的浓度。
2.合成同位素标记的肽段：
使用稳定同位素标记的氨基酸（例如13C或15N）合成所选代表性肽段。这种同位素标记肽段将作为内部标准。
3.肽段纯化：
通过高效液相色谱（HPLC）或其他方法对合成的同位素标记肽段进行纯化，以去除杂质。
4.定量：
使用氨基酸分析、紫外分光光度法等方法测量纯化后的同位素标记肽段的浓度。
5.制备标准品：
将测得的同位素标记肽段与已知浓度的未标记肽段（或目标蛋白质）混合，以形成一系列不同浓度的标准品。这些标准品将用于质谱分析中的校准。
6.冻干和储存：
将制备好的标准品冻干，以便长时间保存。在实验前，可以根据需要将其重新溶解。
百泰派克生物科技--生物药物表征，多组学生物质谱检测优质服务商
相关服务：
提交需求
How to order?
