蛋白分析FAQ汇总

• • 圆二色谱分析——测量光束的高度是多少？

  比色皿支架（单池或Chirascan 6池）的底座与光学中心线（测量光束的中点）之间的距离为15mm。请注意，标配的单池支架包括一个可拆卸的垫片，可将比色皿升高6.5mm，并允许减少样品体积。相关服务:蛋白质圆二色谱分析

• • DDA蛋白质组学、DIA蛋白质组学与靶向蛋白质组学在数据获取方式上有何差异，他们的优点和局限性分别是什么？

  DDA-数据依赖性采集：经典鸟枪蛋白质组学。质谱仪选择MS1中最高强度的离子进行MS2电离。优点：无偏倚的蛋白质检测。无需事先假设。缺点：由于不同的肽段在不同的运行中检测到，所分析的蛋白质重复性低，批量效应大。同样导致许多数据丢失。在确定检测样本中含量最高的蛋白质时误差较大，尤其是对蛋白质浓

• • 在尺寸排除色谱（SEC）分析中获取良好峰形的最佳盐浓度是多少？

  最佳盐浓度取决于有关化合物的性质。通常情况下150-250mM最好，但也必须平衡化合物的离子性和疏水性。盐浓度越低，离子交换越明显。在较高的盐浓度下，由于蛋白质的盐渍化，可以观察到更多的疏水性吸附。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 尺寸排除色谱（SEC）的原理？

  流动相中的分子可能呈现3种构型: 线性构型，例如 PEG; 分支构型，例如葡聚糖; 球状构型，例如蛋白质。因此，给定的分子在溶液中将有一个独特的流体动力学半径。正是由于分子尺寸的差异，才能够通过尺寸排阻液相色谱分离混合物中的化合物。而大分子物质将不能或有限的进入SEC柱子的凝胶孔内，较小的分

• • 什么是GPC？

  尺寸排阻色谱法(SEC)是一种根据分子大小或严格来说根据流体动力学半径分离聚合物的方法。当用有机溶剂作为流动相时，就称其为凝胶渗透色谱法 (GPC)。GPC是聚合物化学中用于测量分子量分布的常用方法。所有GPC分析的共同点是由重复化学单元数量不同的线性分子分布组成的聚合物样品被输送到充满多孔

• • 在流动相中添加添加剂以通过SEC分析蛋白质有哪些优缺点？

  有时在SEC流动相中使用添加剂可以促进蛋白质的溶解，防止蛋白质与固定相发生二次相互作用或使蛋白质变性。用于SEC蛋白质分析的常用添加剂包括十二烷基硫酸钠 (SDS)、尿素和盐酸胍。这三种添加剂都增强了蛋白质的溶解性，并且它们都通过破坏蛋白质的非共价键来促进变性。在样品和流动相中添加SDS等表

• • 选择正确的SEC色谱柱时应考虑哪些因素？

  1、分子量和分子构型； 2、溶剂溶解度：需要什么流动相以及色谱柱是否与该溶剂兼容； 3、亲水与疏水：这将决定流动相中使用的洗脱液的离子强度。一些蛋白质具有疏水位点，需要在流动

• • 如何选择最合适的HIC树脂？

  目标分子与HIC介质的结合机制是分子疏水性的函数，并且因每个分子而异。通常，目标分子的疏水性越强，固体支持物的疏水性越小。相反，分子的疏水性越低，固体支持物的疏水性越高。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 疏水相互作用色谱HIC——缓冲液中较高浓度的过渡金属会与树脂上的官能团形成复合物并束缚结合位点吗？

  这个问题的答案是否定的。通常HIC官能团被设计成惰性的，使其主要与蛋白质形成疏水相互作用。然而，在某些情况下，可能会发生与缓冲液组分和树脂固体支持物的非常轻微的相互作用。更重要的是过渡金属是否与原料中的蛋白质相互作用取决于蛋白质本身而不是HIC树脂。相关服务:蛋白质相互作用分析

• • SDS-PAGE中的浓缩胶和分离胶有什么区别？

  浓缩胶和分离胶是两种类型的聚丙烯酰胺凝胶，用于更好地分离每个样品中的蛋白质。这两种凝胶在pH值、聚丙烯酰胺含量、孔径以及最终用途方面有所不同。 浓缩胶的pH值（6.8）低于分离胶（8.8）。 浓缩胶中的聚丙烯酰胺含量（通常约为4%）低于分离胶中的聚丙烯酰胺含量（约10%），这导致浓缩胶中的孔