蛋白分析FAQ汇总

• • HPLC如何工作？

  泵输送流动相通过装有固定相的色谱柱。自动进样器将样品注入色谱柱。固定相分离样品化合物或分析物。检测器测量从色谱柱分离和洗脱后的分析物。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • HPLC检测器如何工作？

  大多数 HPLC 检测器通过将分析物的物理化学特性转换为电信号来工作。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • HPLC使用哪些类型的检测器？

  HPLC检测器种类繁多。常用的有紫外-可见、荧光、质谱、带电气溶胶、蒸发光散射和折光率检测器。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 样品中的哪些物质会干扰质谱分析？

  盐、缓冲液、洗涤剂和其他小分子会干扰液相色谱分离和质谱仪源电离。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 从样品中去除小的污染物以进行质谱分析的最佳方法是什么？

  对于蛋白质样品，Pierce 聚丙烯酰胺旋转脱盐柱（Thermo Fisher）可用于去除盐和其他小分子量的污染物。如果蛋白质含量低，建议使用丙酮沉淀法，前提是样品至少有10µg。对于源自蛋白质消化物的肽样品，可使用 Pierce Peptide Desalting Spin Columns

• • 可以使用蛋白质脱盐柱净化肽样品吗？

  不可以。蛋白质脱盐柱（例如 Zeba 脱盐柱）使用尺寸排阻，并且具有对于肽样品而言通常过高的分子量截止值。肽脱盐使用反相色谱树脂（例如 C18 树脂）结合肽，以在洗涤过程中去除盐分。相关服务:多肽组学

• • 从样品中去除洗涤剂以进行质谱分析的最佳方法是什么？

  使用丙酮沉淀、透析等较容易在蛋白质水平上去除洗涤剂。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 什么样的缓冲液和溶液与肽净化和 LC-MS 兼容？

  大多数有机溶剂或挥发性缓冲液与 LC-MS 兼容。水和含 0.1% 甲酸的乙腈是质谱分析中分离肽样品最常用的溶剂系统。三氟乙酸 (TFA) 是一种用于离线肽 C18 净化或 LC-UV 分析的替代离子配对剂。相关服务:多肽质谱鉴定

• • 如果已经在蛋白质水平上去除了小的污染物和洗涤剂，还需要在质谱分析之前对肽进行脱盐吗？

  需要。我们建议在蛋白质消化后进行额外的净化，以去除任何残留的盐或部分消化的蛋白质。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 使用 C18 或脱盐柱净化肽样品丢失了大部分肽，是什么地方出了错？

  在中性 pH 或存在有机溶剂（例如乙腈）的情况下，肽不能很好地与反相树脂结合。在脱盐之前，使用甲酸或三氟乙酸 (TFA) 将蛋白质消化样品酸化至 pH <3。通过将样品干燥，确保样品在清洁前后不含有机溶剂。相关服务:多肽组学