蛋白分析FAQ汇总

• • 蛋白质消化后，样品中仍然存在洗涤剂，有什么可以做的吗？

  采用 HIPPR（高蛋白和肽回收）形式使用Pierce Detergent Removal Resin或HiPPR Detergent Removal Spin Columns，可以从肽样品中去除一些洗涤剂。然而，在蛋白质消化之前，使用丙酮沉淀、透析等方法在蛋白质水平上去除洗涤剂更容易。相关

• • 相对定量和绝对定量有什么区别？哪种类型的定量用于蛋白质组样品？

  相对定量是比较不同样品中分析物的含量。绝对定量是用已知标准在不同浓度下测量样品中分析物的实际含量。Label-free、SILAC 和 TMT（串联质量标签）工作流程被用于蛋白质样品的相对定量。重（即 AQUA）肽被用作靶蛋白绝对定量的标准。相关服务:组学分析

• • HPLC——当没有峰值或出现小峰值或负峰值时该怎么办？

  首先应该检查的是检测器灯是否亮着。 检测器和积分器之间的松散或断线也可能是问题的根源。确保泵已打开或流向色谱柱而不是流向废液。 样品瓶可能装有错误的样品或样品可能已经变质。当样品溶剂和流动相的组成差异很大或流动相可能比样品组分对设定的 UV 波长更具吸收性时，就会出现负峰。相关服务:蛋白质纯

• • HPLC——保留时间变化的原因是什么？

  可变的保留时间通常是由于1.泄漏或流动相组成的变化（流动相的微小变化会导致保留时间的重大变化）引起的。 2.泵头中滞留的空气也可以完全随机的增加或减少保持时间。 3.柱温波动，特别是在离子交换色谱中，也会导致保留时间的变化。 4.当溶质质量超过色谱柱容量时，保留时间通常会减少，并且随着体积过

• • HPLC——基线漂移或噪声的原因是什么？

  当存在温度波动（微小的变化可能导致重要的基线漂移）时，通常会出现基线漂移，特别是对于折射率和电导检测器或高灵敏度的紫外检测器。流动相混合室工作不正常也会导致流动相不均匀，从而导致基线漂移。 检测器单元中的污染物或空气积聚也可能导致基线漂移/噪声。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 色谱——什么是混合模式色谱，它与反相、正相和 HILIC 方法有何不同？

  混合模式色谱是一种分离技术，其至少存在两种​​可控的相互作用，以调整化合物的选择性和保留。混合模式色谱可以将反相或HILIC相互作用与离子交换、离子排斥或 pi-pi 相互作用结合起来。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 色谱——混合模式色谱是否兼容 100% 水相和 100% 有机流动相？

  混合模式色谱固定相在表面具有可电离基团，允许使用水相和全有机流动相进行分析。表面上的极性基团可防止反相色谱柱中可能发生的相塌陷。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 色谱——反相混合模式色谱可以分离和保留哪些化合物？

  与单模式色谱相比，混合模式色谱可为更广泛的化合物提供保留和分离。您可以在一次运行中保留和分离中性疏水、疏水可电离、极性、极性可电离化合物以及带正电和带负电的无机离子。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • SDS变性是可逆的吗？

  SDS/MPD系统可用于研究涉及天然蛋白质状态的过程，有实验证明了外膜蛋白质PagP在SDS/MPD缓冲液中的可逆热变性。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离

• • SDS-PAGE的原理是什么？

  SDS-PAGE的原理表明，带电分子被置于电场中时会迁移到与其带电符号相反的电极上。带电分子的分离取决于带电物质的相对迁移率。由于电泳过程中的阻力较小，较小的分子迁移得更快。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离