蛋白分析FAQ汇总

• • 疏水相互作用色谱HIC——进行HIC分析时pH值是否重要？

  建议在蛋白质最稳定性的pH范围内操作。pH可以影响目标分子从色谱柱中结合和洗脱的效率，但这是特定情况，对于不同的分子，从一个pH值到另一个pH值可能不会显示相同的趋势。 相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 离子交换色谱——强离子交换树脂和弱离子交换树脂有什么区别？

  术语“强”和“弱”是指官能团的酸/碱性质。 如果配体来源于强酸或强碱，则称为强离子交换树脂。 如果配体来源于弱酸或弱碱，则称为弱离子交换树脂。 相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 使用离子交换色谱时，如何最大限度地提高目标分子和杂质之间的分离度？

  在离子交换色谱中有许多方法可以实现更好的分离，这些方法也可以应用于其他色谱模式。首先，可以通过增加柱床高度来最大化分辨率。典型的柱床高度范围为15cm-30cm。如果降低线速度，则30cm以上的柱床高度都将导致背压升高而通量降低。柱床高度升高的好处是可以在相同流速下增加样品在色谱柱中的停留时

• • 在什么情况下可选择离子交换色谱进行蛋白质纯化？

  离子交换色谱通常用于从发酵原料中捕获和浓缩目标蛋白质（因为所有蛋白质都具有与其一级结构相关的一些电荷）。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • SEC——如何为目标蛋白质选择体积排阻树脂的尺寸？

  选择目标蛋白尺寸/体积在树脂分离范围中间大小的树脂。这样可以很好的将较大和较小的分子量的化合物从目标蛋白中分离。 相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • HPLC——如果样品溶剂比流动相强会发生什么情况？

  当样品溶剂比流动相强时分析物往往会在色谱柱中洗脱得太快，通常会导致峰变形、增宽、灵敏度差和保留时间缩短。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • HPLC——如果将样品注入较弱的进样溶剂中可以获得更锐利的色谱峰吗？

  这种情况下，样品最初集中在色谱柱的头部并紧密地穿过色谱柱。这种情况有时用于最大限度地减少较大体积样品进样的条带展宽。但需注意的是，样品组分也必须可溶于流动相才能使其起作用。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • HPLC——死体积和停留体积有什么区别？

  死体积是HPLC系统从进样点到检测点之间的体积，不包括色谱柱。死体积可以通过用零死体积连接器替换色谱柱来测量。通过注入非常少量的样品，可以测量注入时刻和最大峰高之间的时间。该时间乘以流速可以很好地估计系统死体积。 停

• • HPLC中常用的缓冲液有哪些？

  由于可电离化合物的保留时间对流动相pH值非常敏感，因此有必要通过添加缓冲液来控制流动相的pH值。当加入少量酸或碱时，缓冲液可维持稳定的pH值。许多物质已被用做HPLC中的缓冲液。用于紫外线检测的HPLC最常用的缓冲液是磷酸盐和乙酸盐。磷酸盐和乙酸盐是特别有用的缓冲液，因为它们可以在低于220

• • HPLC——为什么我的色谱图显示拖尾峰，鬼峰，前峰，分裂峰/肩峰或圆形峰？

  由于多种原因可能会出现拖尾峰：质量过载—当注入较少的样品量（质量）时，峰会变得更加对称或分解为两个单独的峰。因此可以使用更稀释的进样样品来纠正这种情况。二次相互作用—当注入中性化合物（苯乙酮或甲苯）时，峰变得对称。可调节流动相pH值以中和带电的分析物。对于较大内径的色谱柱 (>10 mm)，