Edman方法为什么只可用于确定不超过约50个氨基酸的蛋白质序列

蛋白质是维持生物体正常生理活动的重要分子。它们决定了细胞的结构和活性，为细胞和组织之间的信号传导提供了机制，并催化了支持新陈代谢的化学反应。蛋白质结构决定了功能（或功能障碍）。

Edman降解（Edman degradation）法是测定蛋白质序列的主要手段。在此过程中，异硫氰酸苯酯（PITC）与N-末端自由α-残基反应形成苯基硫代氨基甲酰基（PTH）衍生物，随后裂解以产生噻唑啉酮衍生物（ATZ）和新的N-末端。释放的苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）是稳定的，使用电泳或高效液相色谱法鉴定；在第一个氨基末端残基游离后，对剩余的多肽链循环相同反应，则可游离出下一位置的残基，重复该循环过程可揭示多肽的完整序列信息。

Edman降解通过化学反应可以将氨基酸一个一个鉴定出来，但该方法速度慢（一个周期1h）。并且通过循环衍生化仅限于能够可靠地测定肽链的30个左右氨基酸残基序列，最多可以分析50-60个氨基酸残基。

一些技术可以在此基础上再提高检测限度，但这种操作也会丢失一些蛋白整体的信息且检测精度也大大下降，导致无法区分很多接近的质量信号。若样品纯度达到要求且蛋白N-末端有游离α-残基，它需要大约100 pmol的纯肽样品，每个氨基酸的识别效率>99%。若Edman降解在N-末端没有游离α-残基（N-末端封闭或者被化学修饰）情况下，则不能明确识别到检测信号，因此不能用于准确检测并鉴定翻译后修饰的蛋白。

百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统，为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统，可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统，可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台，可以测出封闭和修饰的蛋白质末端，与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补，保证N端测序服务的顺利进行。