TMT标记步骤

    TMT标记的化学结构由报告基团、平衡基团和肽反应基团组成,其本质是2种、6种、10种或16种相对分子质量均等量的异位标签,这些异位标签最多可含有16种不同相对分子量的报告基团和平衡基团,目前最多能做到16标的TMT(16-plex)。

     

    TMT试剂通过反应基团能够高效地标记酶解后的肽段,其通过肽反应基团与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接,从而实现肽段样本标记。TMT标记步骤:蛋白样本经过胰蛋白酶酶解为小片段肽段,再使用不同的TMT试剂分别标记不同的样本,之后将标记后的样本等量混合后进行质谱分析。在质谱分析中,来自不同样本的同一种肽段带有不同的报告基团,报告基团在二级质谱中碰撞碎裂后产生具有不同分子质量的报告离子。质谱检测中报告离子信号的强弱即可代表肽段在不同样本中的相对丰度,由此实现不同样本中蛋白的相对定量分析。

     

    百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合nanoLC-MS/MS纳升色谱技术,提供基于TMT的蛋白质组学分析服务。Obitrap Fusion Lumos质谱仪是现在分辨率和灵敏度最高的质谱仪,保证了低丰度肽段碎裂片段鉴定的灵敏度;同时在肽段碎裂过程中采取HCD与ETD结合的模式,保证肽段碎裂片段的完整性。您只需将样品寄出并将实验目的告诉我们,我们会负责项目后续所有事宜。

     

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