重组蛋白疫苗N端序列分析
重组蛋白疫苗是一类不包含完整病原体,并由异源表达系统中生产的特定蛋白质抗原配制而成的一类疫苗。常见的异源表达系统有:细菌、哺乳动物细胞、植物细胞和昆虫细胞等,往往需要根据所生产的抗原种类选择合适的异源表达系统。重组蛋白疫苗由于其具有安全性好、稳定性强以及成本较低等几大优势,近年来也受到研究者们的广泛青睐。目前,重组蛋白疫苗已被广泛应用于多种传染病,如预防乙型病毒性肝炎(即乙肝)、破伤风、百日咳、流行性感冒等等。重组蛋白疫苗结构的理解对于了解其功能和稳定性至关重要。
重组蛋白疫苗的活性成分为重组蛋白质,这些蛋白质的序列与结构特性直接影响疫苗的免疫原性和效果。N端序列,即蛋白质的氨基末端序列,是重组蛋白质的重要特性之一。对其进行分析可以帮助确认重组蛋白质是否正确地被表达和修饰,因此对于疫苗的质量控制至关重要。目前,N端测序通常使用Edman降解法进行。这种方法是通过连续的化学反应,逐个去除抗体的N端氨基酸,并对每个去除的氨基酸进行识别。这个过程可以重复进行,直到得到足够长的氨基酸序列。然而,这种方法比较耗时,并且需要足够大量的抗体样品。
生物制品表征N端测序示意图
除了Edman降解法,质谱技术(尤其是串联质谱)也被广泛用于重组蛋白疫苗的氨基酸序列分析,质谱法将抗体蛋白消化成5-25个氨基酸的肽,随即通过LC-MS/MS分析检测,将采集的数据与理论序列数据库进行匹配,进而确认N端序列。质谱可以测出封闭和修饰的重组蛋白疫苗N末端,且已成为首选的全长抗体测序方法。Edman降解法与质谱法不同,其不需要借助蛋白数据库便可以直接进行序列分析。但它不能用于N-末端封闭或修饰后的氨基酸残基。
百泰派克生物科技(BTP),采用ISO9001认证质量控制体系管理实验室,获国家CNAS实验室认可,为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务。我们可为您提供基于高分辨质谱平台以及岛津公司Edman测序系统的重组蛋白疫苗N端序列分析服务。以质谱为基础的N端测序技术可以实现对N端封闭和PEG化蛋白的序列测定,与Edman测序形成互补。此分析可以用于确认重组蛋白是否得到完整表达,检测重组蛋白表达过程是否发生断裂,以及重组蛋白N端序列是否发生修饰等。百泰派克生物科技(BTP)还可根据需求提供定制化技术服务,欢迎免费咨询。
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