蛋白分析FAQ汇总

• • 在什么情况下可选择离子交换色谱进行蛋白质纯化？

  离子交换色谱通常用于从发酵原料中捕获和浓缩目标蛋白质（因为所有蛋白质都具有与其一级结构相关的一些电荷）。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • SEC——如何为目标蛋白质选择体积排阻树脂的尺寸？

  选择目标蛋白尺寸/体积在树脂分离范围中间大小的树脂。这样可以很好的将较大和较小的分子量的化合物从目标蛋白中分离。 相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • HPLC——如果样品溶剂比流动相强会发生什么情况？

  当样品溶剂比流动相强时分析物往往会在色谱柱中洗脱得太快，通常会导致峰变形、增宽、灵敏度差和保留时间缩短。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • HPLC——如果将样品注入较弱的进样溶剂中可以获得更锐利的色谱峰吗？

  这种情况下，样品最初集中在色谱柱的头部并紧密地穿过色谱柱。这种情况有时用于最大限度地减少较大体积样品进样的条带展宽。但需注意的是，样品组分也必须可溶于流动相才能使其起作用。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • HPLC——死体积和停留体积有什么区别？

  死体积是HPLC系统从进样点到检测点之间的体积，不包括色谱柱。死体积可以通过用零死体积连接器替换色谱柱来测量。通过注入非常少量的样品，可以测量注入时刻和最大峰高之间的时间。该时间乘以流速可以很好地估计系统死体积。 停

• • HPLC中常用的缓冲液有哪些？

  由于可电离化合物的保留时间对流动相pH值非常敏感，因此有必要通过添加缓冲液来控制流动相的pH值。当加入少量酸或碱时，缓冲液可维持稳定的pH值。许多物质已被用做HPLC中的缓冲液。用于紫外线检测的HPLC最常用的缓冲液是磷酸盐和乙酸盐。磷酸盐和乙酸盐是特别有用的缓冲液，因为它们可以在低于220

• • HPLC——为什么我的色谱图显示拖尾峰，鬼峰，前峰，分裂峰/肩峰或圆形峰？

  由于多种原因可能会出现拖尾峰：质量过载—当注入较少的样品量（质量）时，峰会变得更加对称或分解为两个单独的峰。因此可以使用更稀释的进样样品来纠正这种情况。二次相互作用—当注入中性化合物（苯乙酮或甲苯）时，峰变得对称。可调节流动相pH值以中和带电的分析物。对于较大内径的色谱柱 (>10 mm)，

• • 什么是葡聚糖凝胶？

  葡聚糖是一种多糖，由葡萄糖残基组成。葡聚糖凝胶（Sephadex）是第一个在分子大小和洗脱行为之间建立密切关系的凝胶。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 凝胶过滤使用的色谱柱是什么？

  凝胶过滤色谱的一个机械装置。凝胶过滤色谱中使用的典型色谱柱具有两种称为相的物质，它们与被检测混合物相互作用，以助强制分离混合物。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 凝胶过滤使用哪种缓冲液？

  对于凝胶过滤色谱，最常用的是Tris缓冲液或磷酸钠缓冲液。建议离子强度至少为0.05 M，以减少被分离的蛋白质与色谱基质之间的非特异性相互作用。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）