蛋白分析FAQ汇总

• • 在等电聚焦电泳（IEF）之前进行烷基化的目的是什么？

  烷基化通过烷基化半胱氨酸来防止不需要的蛋白质修饰，以避免混合二硫键的形成和再氧化，并允许更清晰的聚焦。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 蛋白质是如何在等电聚焦电泳（IEF）凝胶上被分离的？

  等电聚焦电泳 (IEF) 是一种基于等电点 (pI) 分离蛋白质的电泳技术。pI 是指蛋白质不带净电荷并且在电场中不移动的 pH 值。IEF 凝胶有效地产生了一个 pH 值梯度，因此蛋白质根据其独特的 pI 被分离。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 蛋白质组学实验应该如何设计？

  具体的研究目标通常对优化实验设计至关重要。例如，细胞内目标蛋白质的丰度可能决定了实验平台的选择或用于获取数据的仪器时间。每个实验条件包含的生物重复数也非常重要。对于定量分析，至少三个重复是必不可少的，在许多情况下建议五个重复或更多。相关服务:组学分析

• • 我应该使用 TMT 还是 DIA？

  选择 TMT（串联质量标签）还是 DIA（数据独立采集）分析取决于您有多少样品以及您想要识别多少蛋白质。TMT 分析最适合最大化蛋白质组学深度或磷酸化蛋白质组学分析，但在超过 20 个样本时不实用。DIA 分析最适合包含数十个或数百个样本的大型实验。相关服务:定量蛋白组分析

• • HPLC的基本原理是什么？

  HPLC 的分离原理基于样品化合物在流动相（来自泵）和固定相（在色谱柱中）之间的分布。当通过色谱柱时，化合物基团与固定相的相互作用不同，并根据化学性质被保留，因此发生分离。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • HPLC如何工作？

  泵输送流动相通过装有固定相的色谱柱。自动进样器将样品注入色谱柱。固定相分离样品化合物或分析物。检测器测量从色谱柱分离和洗脱后的分析物。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • HPLC检测器如何工作？

  大多数 HPLC 检测器通过将分析物的物理化学特性转换为电信号来工作。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • HPLC使用哪些类型的检测器？

  HPLC检测器种类繁多。常用的有紫外-可见、荧光、质谱、带电气溶胶、蒸发光散射和折光率检测器。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 样品中的哪些物质会干扰质谱分析？

  盐、缓冲液、洗涤剂和其他小分子会干扰液相色谱分离和质谱仪源电离。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 从样品中去除小的污染物以进行质谱分析的最佳方法是什么？

  对于蛋白质样品，Pierce 聚丙烯酰胺旋转脱盐柱（Thermo Fisher）可用于去除盐和其他小分子量的污染物。如果蛋白质含量低，建议使用丙酮沉淀法，前提是样品至少有10µg。对于源自蛋白质消化物的肽样品，可使用 Pierce Peptide Desalting Spin Columns