Edman化学降解的原理和反应特点
Edman降解法(Edman degradation method)是由菲尔•埃德曼(Pehr Edman)首先创立,用于肽链或蛋白质N-末端氨基酸序列分析的常用方法,其反应原理和反应特点如下所述。
Edman降解法原理是异硫氰酸苯酯(PITC)在弱碱(TMA)条件下与蛋白质N端的α-氨基偶联生成苯氨基硫甲酰肽(PTC-AA),然后在无水强酸(TFA)条件下,N端的第一个残基从完整的多肽蛋白链上以2-苯氨基噻唑啉酮(ATZ-AA)的形式裂解下来。之后在稀酸条件下,ATZ-AA转化为更加稳定的苯基乙内酰硫N脲衍生物,即PTH-AA,产生的PTH-AA输送至高效液相色谱中进行分析鉴定出氨基酸类别。重复上述氨基酸鉴定反应以达到对N端氨基酸按照从N端到C端的方向依次对氨基酸序列进行分析。对于序列较长的蛋白质(多肽),还可以将样品先切成小的肽段,先对肽段序列分析,再将肽段信息进行拼接即可获得完整蛋白质的序列信息。
Edman降解法采用标记试剂苯异硫氰酸(PITC),优点是不会破坏余下的多肽链,可重复进行。Edman降解法N端测序可以直接分析蛋白质多肽样品的N端序列,不需要借助蛋白数据库(发生N端突变或者经改造过的蛋白也不例外)。因此,可用于对全新的没有数据库信息的蛋白质多肽进行N端序列分析。同时,该方法样品用量少(仅需50-100pmol),灵敏度高,结果更加准确。因此,采用经典的Edman降解法进行N端序列分析在学术研究上较为普遍。然而,当N末端经过化学修饰或遇到非α-氨基酸时,则无法使用Edman降解法测序;Edman降解法具有通量较低(一般对蛋白质N端50个左右氨基酸序列进行测定)且无法对多个蛋白质进行同时分析的缺点。
百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统,为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统,可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统,可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台,可以测出封闭和修饰的蛋白质末端,与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补,保证N端测序服务的顺利进行。
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