Edman化学降解的原理和反应特点

Edman降解法（Edman degradation method）是由菲尔•埃德曼（Pehr Edman）首先创立，用于肽链或蛋白质N-末端氨基酸序列分析的常用方法，其反应原理和反应特点如下所述。

Edman降解法原理是异硫氰酸苯酯（PITC）在弱碱（TMA）条件下与蛋白质N端的α-氨基偶联生成苯氨基硫甲酰肽（PTC-AA），然后在无水强酸（TFA）条件下，N端的第一个残基从完整的多肽蛋白链上以2-苯氨基噻唑啉酮（ATZ-AA）的形式裂解下来。之后在稀酸条件下，ATZ-AA转化为更加稳定的苯基乙内酰硫N脲衍生物，即PTH-AA，产生的PTH-AA输送至高效液相色谱中进行分析鉴定出氨基酸类别。重复上述氨基酸鉴定反应以达到对N端氨基酸按照从N端到C端的方向依次对氨基酸序列进行分析。对于序列较长的蛋白质（多肽），还可以将样品先切成小的肽段，先对肽段序列分析，再将肽段信息进行拼接即可获得完整蛋白质的序列信息。

Edman降解法采用标记试剂苯异硫氰酸（PITC），优点是不会破坏余下的多肽链，可重复进行。Edman降解法N端测序可以直接分析蛋白质多肽样品的N端序列，不需要借助蛋白数据库（发生N端突变或者经改造过的蛋白也不例外）。因此，可用于对全新的没有数据库信息的蛋白质多肽进行N端序列分析。同时，该方法样品用量少（仅需50-100pmol），灵敏度高，结果更加准确。因此，采用经典的Edman降解法进行N端序列分析在学术研究上较为普遍。然而，当N末端经过化学修饰或遇到非α-氨基酸时，则无法使用Edman降解法测序；Edman降解法具有通量较低（一般对蛋白质N端50个左右氨基酸序列进行测定）且无法对多个蛋白质进行同时分析的缺点。

百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统，为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统，可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统，可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台，可以测出封闭和修饰的蛋白质末端，与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补，保证N端测序服务的顺利进行。