质谱法和Edman降解法N端测序
几乎所有蛋白质合成都起始于其N-末端,其氨基酸序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着重要作用,因此蛋白质的N-末端序列分析对于生物医药等研究非常关键。
蛋白质N-末端测序的两种主要方法是Edman降解(Edman degradation)和质谱法(Mass spectrometry)。质谱法将蛋白消化成5-25个氨基酸的肽,随即通过LC-MS/MS分析检测,将采集的数据与理论序列数据库进行匹配,进而确认N端序列。质谱可以测出封闭和修饰的蛋白质N末端,且已成为首选的全长抗体测序方法。
Edman降解法与质谱法不同,Edman降解法属于化学方法,随之延伸出的Edman测序已成为一种成熟的蛋白质序列测定技术,其不需要借助蛋白数据库便可以直接进行序列分析。Edman测序的一个关键优势是结果直观,可以直接得到氨基酸序列,但它不能用于N-末端封闭或修饰后的氨基酸残基。Edman测序质量随着检测氨基酸的数量上升而下降,所以通常只用于确定前30-60个氨基酸,其检测长度最多不超过100个氨基酸。因此,Edman测序不能用于进行蛋白全长测序。
质谱法和Edman降解法两者各有所长,相互补充。因此,可将质谱法LC-MS/MS的N-端测序技术与基于Edman降解的测序技术相结合形成互补,便可准确鉴定蛋白质的N-端序列。
百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统,为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统,可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统,可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台,可以测出封闭和修饰的蛋白质末端,与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补,保证N端测序服务的顺利进行。
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