mass spectrometry 质谱法测蛋白质步骤和原理

质谱（mass spectrometry，MS）法是检测生物体中蛋白质的主流技术之一，其能准确检测生物样品中蛋白质及多肽的相对分子质量、氨基酸序列及翻译后修饰。因其具有高灵敏度、准确性和自动化程度而广泛应用于蛋白质分析领域，质谱法测蛋白质步骤和原理如下所述。

质谱法测蛋白质主要包括蛋白质样本制备、蛋白质酶解、质谱分析、数据库检索与蛋白质鉴定等检测步骤。

1.蛋白质样本制备：蛋白质样本包括简单和混合复杂蛋白质样本，简单样本包括双相电泳斑点或者纯化蛋白质（SDS-PAGE胶条或者蛋白质溶液，纯度＞90%）等。混合蛋白质样本包括混合蛋白质溶液，或者SDS-PAGE条带等。

2.蛋白酶水解：由于蛋白质质量较大不利于鉴定，需要在质谱鉴定之前使用蛋白酶将蛋白质消化为小片段肽段，通常情况下，将蛋白质酶解为6-20个氨基酸的多肽段用于蛋白质谱鉴定最为合适。常用的酶为胰蛋白酶（trypsin），它于蛋白质的赖氨酸（lysine）)和精氨酸（arginine）处将其切断。

3.质谱分析：通常可遵循简单蛋白质样本用串联质谱（MS/MS）检测，混合蛋白质样本用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测。

4.蛋白质数据库检索与蛋白质鉴定：利用数据库检索软件选择相应的蛋白质数据库对实际检测出的质谱数据进行分析鉴定，同时以打分的形式评判鉴定结果，当打分大于某个阈值时，即判定质谱鉴定成功，反之则鉴定失败。

蛋白质质谱鉴定的基本原理是用蛋白酶将蛋白质消化成肽段混合物，经MAILDI或ESI等软电离手段将肽段混合物离子化，然后通过质量分析器将具有特定质荷比的肽段离子分离开来。通过实际谱图和理论上蛋白质经过蛋白酶消化后产生的一级质谱峰图和二级质谱峰图的比对，进行蛋白质鉴定。

百泰派克生物科技采用Orbitrap Fusion质谱平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，保证了低丰度肽段碎裂片段鉴定的灵敏度；同时在肽段碎裂过程中采取HCD与ETD结合的模式，保证肽段碎裂片段的完整性。可以实现蛋白样品的N端，C端序列分析，蛋白全长序列分析。对未知理论序列的样品，可通过从头测序法进行序列分析。您只需要将您的需求和样品寄给我们，我们会负责项目后续所有事宜，包括样品前处理、质谱分析、质谱原始数据分析和组学分析。