Edman测序法的主要原理

Edman降解（Edman degradation）是从蛋白质多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程，其通过循环耦联-环化裂解-转化-PTH-氨基酸鉴定这一系列化学反应实现蛋白/多肽N端氨基酸的鉴定，深入了解Edman降解法测序的主要原理对蛋白质有序的氨基酸组成的分析具有指导意义。

耦联：即在碱性环境下，Edman试剂苯基异硫氰酸酯（PITC）与蛋白质或多肽链的N末端的α-氨基反应，形成末端残基的苯硫代氨基甲酰基（PTC）衍生物，即PTC-肽。

环化裂解：在无水三氟乙酸（TFA）条件下处理耦合后产物（PTC-肽），将多肽或蛋白的N-端第一个肽键选择性的切断，释放出该氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物（ATZ）。用TFA处理PITC修饰的肽会导致分子内环化，其中PITC耦合物的硫脲与第一个肽键的羰基成分反应。这种环化作用将释放出与第一个氨基酸缀合的PITC，形成一个新的N末端胺进行循环反应。

转化：ATZ衍生物具有脂溶性，可通过有机溶剂（乙酸乙酯或氯丁烷）萃取处理，将ATZ残基从肽中分离出来，在酸性条件下仅使多肽链的氨基末端残基以苯基乙内酰硫脲（PTH）衍生物的形态游离出来，即苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）。

PTH-氨基酸鉴定：每个循环反应从蛋白质或肽的N端释放并衍生一个PTH-氨基酸，然后通过高效液相色谱（HPLC）进行洗脱，再根据保留时间来鉴定裂解生成的氨基酸残基。通过与标准品比较，在第一个氨基末端残基游离后，根据残基从N端到C端的顺序确定每个肽片段的序列，对序列进行测定从而构建蛋白质N末端的氨基酸序列。

百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统，为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统，可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统，可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台，可以测出封闭和修饰的蛋白质末端，与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补，保证N端测序服务的顺利进行。