N端残基的鉴定

    氨基酸序列测定是了解蛋白质性质和功能的重要途径,N端区域又是蛋白质及多肽重要的结构和功能部位,其序列特异性很高,通过N端残基的鉴定可以对大多数蛋白质进行鉴定。蛋白N端测序方法主要分为两大类,即质谱技术和非质谱技术,非质谱技术主要是经典的埃德曼(Edman)降解法。

     

    质谱法(Mass spectrometry-based sequencing)是一种测量离子质荷比的分析方法。在蛋白测序方面,一级质谱主要是给出目标物的分子量,GC-MS一级谱图可以定性分析,LC-MS能用于简单的分子量测定,串联质谱可直接用于测定肽段的氨基酸序列。质谱法用实测的肽段质量去查找蛋白质库,结合适当的计算机算法,可鉴定蛋白质。高灵敏度、高准确性、高分辨率和高通量的生物质谱技术为蛋白质的N端测序提供了一种重要的选择。

     

    Edman降解法(Edman degradation method)由埃德曼(P. Edman)所创立,即在弱碱性条件下使多肽/蛋白与异硫氰酸苯酯(PITC)反应,然后用酸处理,从多肽链上仅使氨基末端残基以氨基酸的苯基乙内酰硫脲衍生物的形态游离出来,然后进行分析。Edman降解法可在不依赖数据库匹配的情况下直接测序,其对于整体纯化的蛋白的N端序列分析和新开发蛋白(不依赖数据库匹配)仍是很有价值的研究技术。但Edman降解方法受到以下诸多限制,如用于序列分析的蛋白质或多肽必须是高纯度的,N端封闭的蛋白质难以进行Edman反应,不适于高通量分析,灵敏度不够。

     

    综上所述,蛋白质和多肽的N端序列分析,随着经典Edman降解法测序、基于质谱的测序技术不断地发展和完善,获得了丰富的N-末端肽序列信息,为蛋白质的准确鉴定提供了有力的依据,加深了我们对蛋白质的结构和功能的研究。

     

    百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统,为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统,可以测定N端30个氨基酸的序列信息。百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台,可以测出封闭和修饰的蛋白质末端,与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补,保证N端测序服务的顺利进行。

     

    相关服务:

    蛋白质N/C端测序 

    生物制药N/C端测序 

    蛋白全序列测定 

    蛋白从头测序 

    基于Top down自上而下法的蛋白质测序 

    基于质谱的序列分析 

    多肽测序 

    抗体测序

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