Edman降解法测序反应条件

Edman降解（Edman degradation）法即在弱碱性条件下使蛋白质肽链N末端游离α残基与异硫氰酸苯酯（PITC）反应，然后用酸处理，从多肽链上仅使氨基末端残基以氨基酸的苯基乙内酰硫脲（PTH）衍生物的形态游离出来，然后测序并进行序列分析。

Edman降解法测序是通过一次次循环反应完成的，在每一轮的循环步骤中都包含偶联、裂解、转化以及氨基酸识别过程，其反应条件如下所示：

偶联条件：以气态形式输送12%三甲基胺水溶液（pH=8.0-9.0），输送含有异硫氰酸苯酯（PITC）的正庚烷溶液并重复碱溶液的输送。45-48℃进行偶联化学反应，惰性气体干燥并使用正庚烷和乙酸乙酯分析纯溶液洗涤。

裂解条件：输送几微升的无水三氟乙酸（TFA）并在45-48℃进行裂解，之后用惰性气流干燥除酸。输送丁基氯以溶解释放的苯胺唑啉酮(ATZ）氨基酸，ATZ氨基酸丁基氯混合溶液输送入转化器，并重复使用丁基氯溶剂抽提。

转化条件：输送25%-40%无水三氟乙酸（TFA）水浴液（转化介质R4）至转化器，45-50℃转化10-20分钟。苯异硫尿氨基酸（PTH氨基酸）溶解于一种合适的溶剂混合物，如20%乙腈水溶液含或不含乙酸钠添加剂以调节pH；这样可直接注入高效液相色谱（HPLC）系统的HPLC色谱柱上柱。

序列分析：运行空白循环，运行PTH-氨基酸并校准，将每个循环切割下来的氨基酸于PTH-氨基酸进行比较并与前后循环反应后的氨基酸进行对比，最终确定蛋白质肽链N-末端氨基酸序列。

百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统，为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统，可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统，可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台，可以测出封闭和修饰的蛋白质末端，与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补，保证N端测序服务的顺利进行。