在流动相中添加添加剂以通过SEC分析蛋白质有哪些优缺点？

有时在SEC流动相中使用添加剂可以促进蛋白质的溶解，防止蛋白质与固定相发生二次相互作用或使蛋白质变性。用于SEC蛋白质分析的常用添加剂包括十二烷基硫酸钠 (SDS)、尿素和盐酸胍。这三种添加剂都增强了蛋白质的溶解性，并且它们都通过破坏蛋白质的非共价键来促进变性。在样品和流动相中添加SDS等表面活性剂会破坏球状蛋白质的天然形状，形成尺寸小得多的棒状结构，从而提高色谱分析效率。盐酸胍和尿素将蛋白质结构破坏为随机卷曲（较大）的结构。在蛋白质溶解度有限或怀疑样品和色谱柱基质之间存在非特异性相互作用以及添加另一种缓冲液或水溶性有机溶剂无效的情况下，应考虑在蛋白质SEC分析中使用添加剂。当色谱柱使用大多数添加剂时，SEC色谱柱的性能会发生不可逆转的变化。例如，与没有添加剂的色谱柱运行相比，样品的保留时间可能会发生变化，两个峰之间的计算分辨率可能会发生变化。此外，几乎不可能从色谱柱中完全去除添加剂。因此，必须指定色谱柱在其整个使用寿命期间仅在流动相中使用添加剂。



相关服务:
• 蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）