如何分析宿主细胞蛋白？
由于蛋白质药物中蛋白质浓度的线性动态范围很宽（覆盖四到五个数量级），因此 HCP 检测具有挑战性。在基因工程药物的开发和生产过程中，有几种方法可用于检测 HCP 和其他杂质。1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）。在 HCPs 分析方法中，anti-HCPs ELISA 被认为是金标准。该方法（检测蛋白质浓度在 1~100 ppm 范围内）适用于产品开发和过程控制。然而，与传统的ELISA不同，anti-HCPs ELISA并不检测单一靶点，总HCPs“抗原”是一个复杂的蛋白质组。传统的HCPs抗体制备方法是利用含有空表达载体的宿主细胞制备抗原免疫动物获得抗血清，分离纯化多克隆抗体用于ELISA检测。在生产HCPs抗体/标准试剂时，要保证生产细胞系和生产工艺的特异性，并准确定量其蛋白浓度。2. 二维凝胶电泳（2-DE）。2-DE 与荧光染色一起使用是另一种常用的 HCP 分析方法。2-DE 通常用于上游或下游工艺开发和表征。2-DE的原理是根据等电点（第一维）和大小（第二维）分离不同的蛋白质。凝胶中的斑点分析不需要免疫印迹，避免了膜转移步骤，并且可以从产品中分离出痕量的 HCPs 杂质。但这种方法只能进行半定量分析，因为它的动态范围很窄（两到三个数量级），需要结合其他技术（如质谱）来鉴定HCP。3. 质谱（MS）。MS 越来越多地被用于检测 HCPs，以帮助识别可能的风险因素并评估纯化过程。虽然 ELISA 最常用于检测 HCPs 的总量，但它无法识别超出 ELISA 试剂盒检测范围的 HCPs。与传统的ELISA方法相比，质谱法具有开发时间短、特异性鉴定和定量所有HCPs、无偏检测所有杂质蛋白、高动态范围（高达6个数量级），以及快速调整等优点。通用 UPLC/MS 分析可以全面识别和量化生物治疗性蛋白质样品中的 HCP。该分析方法采用在线二维液相色谱分离多肽，然后使用高分辨率、高质量和准确的质谱仪进行蛋白质鉴定和定量。平行反应监测（Parallel reaction monitoring，PRM）质谱定量技术可以扫描一个母离子产生的所有子离子，具有较高的识别准确度和定量通量，可以准确识别目标HCPs多肽。
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