提交蛋白质样品进行质谱鉴定需要做什么?

    对于单个蛋白凝胶条带: 采用小型凝胶进行电泳并进行考马斯亮蓝染色。也可以使用SYPRO™ Ruby进行染色,但银染条带可能不能涵盖足够的蛋白质用于鉴定。通过与已知浓度的标记物进行比较来预估条带中的蛋白含量。染色时间不得超过15分钟。如果将凝胶染色太久,染料碎片会影响后续脱盐步骤。用干净的手术刀切下蛋白条带,并切除多余的凝胶。过量凝胶将对分析不利。如果您将多个泳道的凝胶条带作为一个样品提交,请剪切并丢弃条带之间的空白部分凝胶! 对于复杂样品(如裂解物): 不要将凝胶跑完,如果存在堆叠凝胶,仅将样品在凝胶中电泳不超过0.75 cm。 对于没有明显堆叠凝胶的预制凝胶,只需将样品从孔中跑出不超过0.75 cm即可。条带的宽度不应超过单个微型凝胶孔道(~2mm)。停止电泳前加入kaleidoscope标记有助于验证高分子量蛋白质是否已经进入凝胶。对上述凝胶进行染色。凝胶块中不能含有染料,因为这样会导致样品不能在液相色谱上正常运行。仅取考马斯染色的蛋白质凝胶块区域,还需提供凝胶上蛋白质含量的大概预估值。理想情况下,凝胶块的宽度约为2mm。此外,如果蛋白凝胶条带中含有过多的凝胶,将会影响所能鉴定到的蛋白数目,提交样品前应切除所有多余的空白凝胶,并将每个凝胶条带或凝胶块单独收集在容量为500ul的EP管中。


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