如何准备和提交用于蛋白质分子量测定的样品?

    样品推荐: 建议样品体积中至少含有300pmol的蛋白质,在30μM的浓度下,体积约10μL,当然样品中所含蛋白质越多越好。样本应该是纯的,否则解卷积可能不起作用。 去污剂与质谱不兼容,必须在分析前从缓冲液中除去。去除缓冲液中的所有聚合物或去污剂(例如TritonX、NP-40、SDS或类似聚合物),它们的强离子信号会掩盖蛋白质MS信号,也会堵塞蛋白质进样口并污染检测线路。 去除低粘度缓冲成分(例如甘油或PEG),因为它们会堵塞系统中的检测管道。 10mM的乙酸铵溶液是理想缓冲液。也可以使用Tris或磷酸盐等作为缓冲液,但不推荐使用,因为这些缓冲液中的盐会降低质谱检测中的信号,导致解卷积和质量测定效果不佳。 样品纯化: 使用水/乙腈缓冲液进行FPLC/HPLC纯化、丙酮或TCA沉淀进行充分洗涤是样品纯化的两种常用方法。通过离心和透析进行MW(分子量)过滤对某些分子起作用,但一些去污剂会形成胶束使其成为大分子质量物质,因此它们不能通过MW过滤或透析去除。可以使用树脂去除洗涤剂。如果要更换缓冲液,我们建议将其更换为0.1%甲酸和水。如果您需要中性pH值,则可以使用乙酸铵缓冲液。


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