组织Co-IP
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用,是研究蛋白互作的经典方法。
在组织Co-IP实验过程中,为了保证足够多的蛋白浓度以维持原本存在的蛋白质互作状态,通常需要准备足够多的动物或者组织样品。且Co-IP的实验条件很难一次成功,常需要反复摸索,尤其当蛋白丰度较低、相互作用力不强、使用不易提取蛋白的组织等情况时,组织Co-IP实验可能无法继续进行。因此,用于Co-IP实验需要准备动物组织细胞>500mg,植物组织>2g的样品,样品采集后应速冻于-80℃保存并避免反复冻融。
之后利用特异性抗体捕获组织中靶蛋白,形成抗体-靶蛋白复合物,同时使用能够与抗体结合的基质(如Nanoab-Agarose)对复合物进行沉淀和固定。相应的,与组织中靶蛋白相互作用的互作蛋白也将被沉淀下来。最后对基质上的非特异性蛋白进行洗去得到互作蛋白,通过SDS-PAGE进行分析、Western blot检测即可对互作蛋白进行表征。
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