串联质谱法鉴定蛋白质
- MALDI-TOF/MS
- MALDI-TOF/MS的原理
- MALDI-TOF/MS的优势
- MALDI-TOF/MS的应用
- LC-MS/MS
- LC-MS/MS的优势
- LC-MS/MS的应用
蛋白质鉴定方法
这里的蛋白质鉴定是指利用一定的生化和物理方法对蛋白质进行准确的筛选和鉴定。传统的蛋白质鉴定方法，包括免疫印迹、已知或未知蛋白质的共迁移分析以及内肽的化学测序，这些方法复杂、耗时且准确性较低。
蛋白质鉴定方法已经从图像分析技术、微测序、氨基酸组成分析发展到质谱技术。图像分析技术一般使用光谱仪。整个过程涉及到一些斑点的检测、背景抠除、斑点匹配和数据库构建。 图像分析和氨基酸组成分析需要结合其他蛋白质鉴定技术才能完成。微测序技术更新迅速，实现了蛋白质的自动鉴定。如今，研究人员越来越倾向于选择质谱相关技术进行快速蛋白质鉴定。
质谱鉴定蛋白质的不同方法
质谱仪可以将蛋白质的多肽指纹图谱和多肽片段的测序结果与蛋白质数据库中蛋白质的理论多肽质量指纹图谱(PMF)进行比较，以寻找最佳候选蛋白质。与质谱相关的蛋白质鉴定方法包括基于MALDI-TOF的蛋白质指纹图谱和基于LC-MS/MS的多肽测序。
MALDI-TOF 是一种基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪。基于MALDI-TOF的蛋白质指纹图谱方法是用某种蛋白水解酶（通常是胰酶）消化样品并获得MS谱图，从而生成所有多肽（或MH+）的质量。这些质量被用作指纹与数据库中的蛋白质进行并打分，得分最高的蛋白质则称为候选蛋白质。
MALDI-TOF/MS的优势在于高精度离子反射器和延迟离子提取，可以快速收集 MALDI-TOF/MS数据并分析结果。
主要用于临床医学、食品工业和动植物检疫中微生物的鉴定和分类。
（1）LC-MS/MS的原理
高效液相色谱-质谱联用系统可通过分析物质的分子量和元素组成，研究分子结构等信息。在利用LC-MS/MS多肽测序进行蛋白质鉴定时，蛋白酶消化（通常是胰蛋白酶消化）的多肽混合物通过HPLC分离。串联质谱仪和HPLC用于肽裂解，可以获得每个多肽的MS/MS谱图（每个样品通常有数千个MS/MS谱图）。每个MS/MS谱（对应于特定的多肽序列）用于在蛋白质数据库中搜索匹配的多肽，以最终鉴定蛋白质。特别是反相液相色谱和串联质谱的结合，可以检测到几十皮摩尔的水平。如果将毛细管色谱法与串联质谱法相结合，则可以检测到低浓度的蛋白质，即低于飞摩尔和原子水平的蛋白质。目前，蛋白质鉴定大多采用酶解、液相色谱分离、串联质谱和计算机算法相结合的方法。
LC-MS/MS能以高灵敏度和特异性分析小型或中型极性分子。
LC-MS/MS可以确定蛋白质的分子量，分析肽和蛋白质修饰位点，并识别蛋白质。它可用于生物化学、农业和临床医学等领域。
百泰派克生物科技-您身边的生物质谱专家
北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）从事以生物质谱为依托的生物药物表征，大分子物质（包括蛋白质、多肽、代谢物）质谱分析以及小分子物质检测服务。公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务，业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等。7大质量控制检测平台，服务3000+企业，10000+客户的选择，致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!
参考文献
1.Raquel Pérez-Míguez, María Luisa Marina, María Castro-Puyana. High resolution liquid chromatography tandem mass spectrometry for the separation and identification of peptides in coffee silverskin protein hydrolysates. Microchemical Journal, 2019,149.
2.Swearingen Kristian E, Eng Jimmy K, Shteynberg David, et al. A Tandem Mass Spectrometry Sequence Database Search Method for Identification of O-Fucosylated Proteins by Mass Spectrometry. Journal of proteome research, 2019,18(2).
相关服务
How to order?
