多肽液相色谱如何进行样品制备?
多肽液相色谱(液相色谱,Liquid Chromatography,缩写为LC)是一种常用的多肽分离和纯化方法。其样品制备方法可能因具体的实验目的和样品性质而异,因此,在实际操作过程中,建议参考相关文献和实验方案,优化样品制备方法。常用的制备样品的基本步骤如下:
1.样品溶解:
首先将多肽样品溶解在适当的溶剂中。通常情况下,可以使用水、乙腈、甲醇等有机溶剂或者含有一定比例有机溶剂的缓冲液来溶解多肽。选择哪种溶剂主要取决于多肽的性质,例如其溶解度、稳定性等。需要注意的是,选用的溶剂应与液相色谱系统的移动相相容。
2.蛋白质处理:
若样品中含有杂质蛋白质,可以通过加热、酸处理、酶处理等方法进行去除。处理后的样品需要在进行下一步之前恢复到适当的pH值。
3.沉淀去除:
为了去除样品中的沉淀物和大颗粒杂质,可以对样品进行离心。一般情况下,使用10000-15000g离心10-15分钟即可。离心后,将上清液转移到新的离心管中。
4.滤膜过滤:
为了进一步去除微小杂质,可以使用微孔滤膜(如0.22μm或0.45μm)对样品进行过滤。这有助于避免液相色谱柱堵塞,提高色谱分离的效果。
5.浓缩和脱盐:
如果样品中含有过多的盐分或溶剂,可以通过离心浓缩器、凝胶过滤柱等方法进行浓缩和脱盐。处理后的样品可以用移动相进行稀释。
6.样品定容:
将处理好的样品定容至适当体积,并记录样品浓度。之后,根据液相色谱系统的要求,对样品进行稀释。
7.样品储存:
将制备好的样品储存在低温(如-20℃或-80℃)条件下,以减少样品的降解。
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