【Western Bloting实验】转膜不充分是什么原因？

Western blotting实验中，转膜（transfer）是将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）转移到膜（如聚偏氟乙烯膜（PVDF）或硝酸纤维素膜（NC））的过程。转膜不充分可能导致蛋白质信号弱或检测不到。以下是一些可能导致转膜不充分的原因：

1.转膜时间和电压设置不当：转膜条件可能需要根据蛋白质的大小和凝胶的厚度进行优化。对于大分子量蛋白质，可能需要较长的转膜时间或较高的电压以确保充分转移。

2.转膜缓冲液成分不合适：转膜缓冲液通常包含Tris、甘油醇和SDS。缓冲液成分不当可能影响蛋白质的转移效率。使用适当的转膜缓冲液配方并保持其新鲜至关重要。

3.凝胶处理不当：在转膜之前，凝胶需要用电泳缓冲液进行平衡。如果平衡时间过短或者没有进行适当的平衡，可能会影响蛋白质的转移。

4.膜的选择和预处理：确保选择合适的膜类型，并根据需要对膜进行适当的预处理（如PVDF膜需要用甲醇湿润）。

5.转膜系统装配不当：确保在装配转膜系统时正确摆放凝胶、膜、滤纸和海绵垫，以避免气泡产生。气泡可能阻止蛋白质与膜接触，从而导致转膜不充分。

6.转膜过程中冰冷不足：转膜过程中要确保缓冲液冰冷，以防止过多热量的产生。过多热量可能导致蛋白质变性和转移效果不佳。

7.转膜过程中电极连接不良：确保转膜过程中电极连接良好，以避免电流不足或不稳定。

8.蛋白质加载量过低：如果在转膜过程中蛋白质的加载量过低，可能会导致难以检测到的蛋白质信号。

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