在做SDS-PAGE时候怎么算蛋白上样量? 上样量多少合适啊?上样体积多少呀?

解决SDS-PAGE实验中关于“上样量”和“上样体积”的问题，需要根据具体实验类型、实验目的和实验材料来进行分析。为了给出准确建议，需要结合您的样本浓度、凝胶孔尺寸、实验目的（如考察条带清晰度、后续转膜或质谱应用）等信息。

 

下面按标准实验逻辑，分步说明如何正确计算和判断：

1、确定总上样量（以μg蛋白计）

根据实验目的，推荐参考如下：

 



 

 

简要原理：

• 上样量过低，条带弱或不可见；
• 上样量过高，条带拉伸、溢出、背景高；
• WB时，因抗体灵敏度不同，通常取中高量。

 

2、计算上样体积（以μL计）

已知样本浓度（μg/μL）后，根据目标上样量简单换算：上样体积（μL）=目标上样量（μg）/蛋白浓度（μg/μL）​。

如果蛋白浓度较低（<1 μg/μL），可能需浓缩或者调整孔数。

 

3、上样总量需考虑孔容量

典型10%或12%凝胶小孔（如Mini-PROTEAN，Bio-Rad系统）每孔最大可承载20–30 μL液体。若体积大于此范围，可能需：

• 浓缩样本
• 分次上样
• 调整上样浓度

 

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