蛋白冻在-80怎么让它恢复活性呢？

在实验室中，蛋白质通常会被储存在极低温度下（如-80°C）以减少降解和保持其活性；当我们需要使用这些蛋白质时，正确的解冻步骤对于其活性的恢复至关重要。以下是一些步骤和注意事项，帮助确保蛋白质在解冻后尽可能保持其原有的功能特性。

 

一、缓慢解冻

1、将冻存的蛋白样品从 −80°C转移到 4°C 冰箱 中，缓慢解冻，通常需要数小时。

2、避免直接在室温下解冻，以减少蛋白因温度骤变而变性。

 

二、使用合适的缓冲液

1、确保蛋白冻存时使用了保护剂（如甘油、海藻糖、或 DMSO）和适当的缓冲体系（如 pH 稳定的 Tris 或 PBS）。

2、如果蛋白需要重新稀释或透析，使用适合其活性的缓冲液恢复体系。

 

三、避免反复冻融

1、每次只解冻必要的量，避免多次冻融导致蛋白聚集或失活。

2、如果可能，分装样品以减少冻融循环。

 

四、检查和调整环境条件

1、pH 和离子强度：蛋白的活性对 pH 和盐浓度敏感，解冻后用透析或稀释调整到最适条件。

2、添加辅因子：一些酶类蛋白可能需要金属离子或辅因子才能恢复活性。

 

五、温和混匀

轻轻翻转或缓慢涡旋样品，避免剧烈振荡造成机械剪切力损伤蛋白。

 

六、测试活性

1、解冻后立即进行活性测试，确认蛋白功能是否完整。

2、如果发现活性下降，可以尝试添加保护剂（如 BSA）或调整样品浓度来提高稳定性。

 

七、如果有聚集或失活问题

使用以下策略：

1、透析：移除冻存时可能影响蛋白活性的低温保护剂。

2、超声波或离心：去除聚集的蛋白碎片。

3、重折叠方法：使用变性-复性缓冲液（如尿素或胍盐）进行重新折叠。

 

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