圆二色谱分析蛋白二级结构，怎么准备样品，样品浓度，样品buffer？

圆二色谱（Circular Dichroism，CD）是一种常用于分析蛋白质二级结构的光谱技术。样品的准备和测量条件对CD谱的质量和准确性有很大影响。在制备样本过程中，需要注意：




1.样品准备：

• 蛋白质需要纯化，尽量避免杂质和其他干扰物质。
• 如果蛋白质需要进行重折叠，应确保获得正确折叠的蛋白质。
• 避免使用可能影响CD信号的试剂，如去除盐、重金属离子等。
• 在测量前，通过离心或过滤除去悬浮颗粒，以避免光散射干扰。



2.样品浓度：

• 蛋白质的浓度取决于测量波长范围。在远紫外区（190-260 nm）测量二级结构时，建议使用较低的蛋白质浓度（通常在0.1-1 mg/mL之间）；在近紫外区（260-320 nm）测量三级结构时，可以使用较高的蛋白质浓度（通常在1-10 mg/mL之间）。
• 适当调整测量通道的宽度，以适应不同浓度的样品。对于低浓度样品，可以使用较宽的通道（1-10 mm）；对于高浓度样品，可以使用较窄的通道（0.1-1 mm）。



3.样品buffer：

• 选择适当的缓冲液以保持蛋白质的稳定性和折叠状态。常见的缓冲液如PBS、Tris-HCl等，pH值通常在7.0-8.0之间。
• 避免使用高浓度的盐、尿素等，因为它们可能干扰CD信号。
• 避免使用可能吸收紫外光的缓冲液组分，如某些氨基酸、核苷酸等。
• 保持缓冲液浓度较低（通常在5-20 mM之间），以减少光吸收和干扰。
• 在实际操作中，可能需要对样品条件进行多次尝试和优化，以获得清晰、可靠的CD谱。在获得CD谱后，可以通过专业软件（如CDNN、BestSel等）对蛋白质二级结构进行定量分析。



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