蛋白互作分析Pull-down
Pull-down 技术又称蛋白质体外结合实验(Binding assay in vitro), 是一种行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,蛋白互作分析Pull-down可用于初步研究两种蛋白质的相互作用分析。
Pull-down技术是通过将靶蛋白亲和固定于某种基质上作为“诱饵蛋白”,当细胞抽提液与该基质接触时,与靶蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,其他无相互作用的蛋白质则随洗脱液流出。被吸附的配体蛋白则可通过改变洗脱液或洗脱条件从基质上洗脱下来,进行纯化富集即可用于质谱检测。因此,通过Pull-down技术可以确定靶蛋白和互作蛋白的直接相互作用关系。
在目前的研究过程中,可将基质上的“诱饵蛋白”与一种更易于纯化的配体蛋白相融合,即谷胱甘肽S转移酶(GST)融合蛋白,使Pull-down技术得到更有效的利用。GST融合蛋白可与固定的谷胱甘肽(GSH)相结合而共同吸附在色谱柱上,当抽提物流经色谱柱时,即可得到与“诱饵蛋白”相互作用的互作蛋白。
Pull-down技术一般用于体外转录或翻译体系,如酵母双杂交系统中检测蛋白之间的相互作用。但其并不能真实的反映正常生理条件下蛋白之间的相互作用,因为在体内它们不一定相互结合。
百泰派克生物科技利用进口的GST pull-down试剂盒,能够快速准确的完成蛋白互作实验,结合公司先进的UPLC-MS质谱平台,推出基于Pull-down靶蛋白质谱鉴定分析的一站式技术服务,寻找与诱饵蛋白相互作用的靶蛋白并进行质谱鉴定。您只需将您的需求告诉我们并寄送样品,我们会负责项目后续所有事宜,包括样品前处理、Pull-down、质谱分析、质谱原始数据分析。
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