蛋白分析FAQ汇总

• • edman反应终止剂是什么？

  Edman降解是一个自动化的、连续的反应过程，并没有明确的"终止剂"。整个过程是通过控制反应条件而非使用终止剂来结束每一步的反应。如果想使Edman降解过程终止，可采用以下方法：停止添加试剂：不再向反应系统中添加苯异硫氰酸（PITC），从而阻止新的循环开始。洗涤样品：可以通过多次洗涤样品来移

• • 请问评判液质方法优化的指标是什么呢，TIC离子峰的分离度可以作为评判液质方法优化的指标吗?二级谱图和理论谱图配对峰的连续性是什么

  评判液质方法优化的指标通常包括液质的分辨率、灵敏度、准确度、重复性等。TIC离子峰的分离度可以作为评判液质方法优化的一个指标。二级谱图和理论谱图配对峰的连续性是指在二级质谱的图谱上，实验得到的离子峰能否与理论预测的离子峰一一对应，并且这种对应关系是否连续不断。如果二级谱图和理论谱图的配对峰连

• • 蛋白和小分子互做怎么测试？

  蛋白质与小分子互作检测有很多种方法，包括质谱（MS）技术、共沉淀分析、表面等离子体共振（SPR）技术、核磁共振（NMR）和荧光共振能量转移（FRET）等。

• • 准备做组织蛋白，怎么准备蛋白样品呀？跟跑wb的提蛋白要求是一样的吗？

  组织样本的蛋白质制备与WB的样品制备有些许不同，主要因为蛋白质组学分析（如质谱分析）对样品纯度和处理过程的要求更为严格。两种方法在裂解缓冲液、酶抑制剂和其他添加剂、样品处理和消化和样品处理和消化等方面有一些差异。

• • 含有不同蛋白成分的蛋白质(如大豆蛋白)进行圆二色光谱分析时该怎么 计算氨基酸残基数和分子量呢"吗?

  圆二色谱是一种光谱技术，主要用于研究蛋白质、核酸等大分子的二级结构和构象变化。只能提供关于蛋白质二级结构的信息（如α-螺旋、β-折叠和无规卷曲的比例），并不能直接用于计算氨基酸残基和分子量。要计算氨基酸残基和分子量，通常使用的方法是质谱（MS）。质谱技术能够精确测定分子的质量，并通过分析碎片

• • 蛋白质圆二色谱分析中，没有纯化过的样品可以测吗?蛋白浓度 有要求吗?

  在蛋白质圆二色谱（CD）分析中，未纯化的样品通常不建议直接测量。未纯化样品可能含有其他杂质或组分，这些杂质会干扰CD光谱的结果，导致信号不清晰或难以解释。为了获得准确可靠的结果，最好先对蛋白质进行纯化，确保样品中主要成分是目标蛋白质。对于CD分析，蛋白浓度是一个需要特别注意的参数。蛋白浓度过

• • 请问如何制备蛋白质谱样本?

  蛋白质谱样本的制备是一项复杂的任务，需要在各个步骤中精确地控制实验条件。包括蛋白质的提取、纯化、定量、消化、纯化以及重悬。下面列出了一般的步骤和技巧。一、蛋白质提取：从生物组织或者细胞中提取蛋白质。使用适当的缓冲液进行细胞破碎，例如RIPA缓冲液、PBS等；常用的物理破碎方法包括超声、高压均

• • 圆二色光谱蛋白质中含有多个蛋白,该怎么选择氨基酸残基 数和分子量呢?

  在进行含有多个蛋白的样品圆二色谱（CD）分析时，选择氨基酸残基数和分子量时应考虑：氨基酸残基数：选择适合的氨基酸残基数主要是为了确保光谱的信号强度足够清晰，通常建议蛋白质的氨基酸残基数在50到200之间。较短的多肽可能信号较弱，而过长的蛋白质则可能导致光谱复杂。分子量：分子量会影响蛋白质的结

• • 请问用标准曲线怎么算摩尔比呢？

  用标准曲线法计算摩尔比，首先根据已知浓度的标准品制备一系列浓度不同的标准溶液，然后测量它们的响应（比如吸光度），绘制标准曲线。最后，通过测量待测样品的响应值，根据标准曲线的方程计算出待测样品中目标物质的摩尔比。

• • 质谱测蛋白修饰位点，位点会有和实际不一致的情况吗？

  是的，质谱测定蛋白修饰位点可能会出现与实际不一致的情况，主要有以下一些原因：1、技术局限性：虽然质谱技术是一种强大的工具，能够精确地检测蛋白质修饰位点，但任何技术都有其局限性。质谱的分辨率和灵敏度可能受到多种因素的影响，如样品处理、仪器状态、分析参数设置等。这些因素可能导致质谱检测到的修饰位