请问脱盐之后怎么知道脱没脱干净？

脱盐（Desalting）是否彻底，直接影响后续电喷雾效率、峰形、离子抑制等问题。下面从实验角度逐步说明如何判断脱盐是否干净。

 

一、判断脱盐是否彻底的常规方法

1、质谱检测（最直接有效）

将脱盐前后的样品直接上质谱，观察以下几点：

（1）是否出现大面积的强离子抑制现象（如信号弱、只有基线）；

（2）是否出现大量低分子量离子簇（m/z ~100–300），常见于Na⁺、K⁺、TFA等残留；

（3）目标峰是否清晰，质谱图是否“干净”。

 

判断标准：

• 若脱盐彻底，背景离子干扰显著减少，目标信号增强，离子峰尖锐清晰；
• 若脱盐不彻底，会看到许多小离子簇、拖尾严重、信噪比下降。

 

2、紫外检测或纳米滴定法检测盐离子

适用于有条件实验室，虽然不常规，但在特定场合下可用于定量残留盐。

（1）使用电导率检测：比对脱盐前后电导率变化；

（2）使用AgNO₃检测Cl⁻、K₂CrO₄检测Na⁺等经典滴定；

若使用C18小柱脱盐，也可收集flow-through，检测盐是否被完全冲出。

 

3、MALDI-TOF预检

若后续是做MALDI，可以先点样检测：

（1）成分复杂或盐残留较多时，结晶质量差，点样后呈不均匀颗粒状；

（2）脱盐干净后结晶更均匀，谱图信号明显增强。

 

4、观察浓缩后样品的物理性状

若使用SpeedVac浓缩：

（1）浓缩后样品若有盐残留，常形成晶体颗粒；

（2）若脱盐彻底，样品浓缩后呈均匀透明、无可见结晶；

（3）可用少量水重溶试探，看是否易溶。

 

二、实用建议（从源头减少盐污染）

• 使用低盐/无盐裂解液处理蛋白（如尽量避免PBS高盐）；
• 脱盐时优选C18柱、Ziptip、HILIC微柱等合适载体；
• 使用50% ACN + 0.1% FA洗脱，可同时带出肽段而抑制盐；
• 洗脱液尽量浓缩至小体积（如<10 μL），避免后续注样盐过载。

 

三、经验判断总结

 



 

最可靠的方式是将脱盐前后样品上质谱观察信号变化与背景干扰；是否彻底脱盐可从离子抑制、低分子离子残留和信噪比变化综合判断。

 

百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商

 

相关服务：

蛋白质质谱鉴定