蛋白分析FAQ汇总

• • 做TMT蛋白定量的时候为什么要先用SDS-PAGE做一下预实验呢?

  在进行TMT蛋白定量实验时，通常会先使用SDS-PAGE做预实验。主要有以下几点原因：样品质量评估、样品均一性确认、选择适当的蛋白质切割点、去除干扰物质、确认蛋白质标记效率等。

• • 圆二色谱检测的两个样品的结构比例差异较大；但远紫外和近紫外图谱分析结果一致，且P值>0.05。为何会出现这种差异？以哪一结果为准

  在解释圆二色谱（CD）和紫外（UV）光谱结果之间的差异时，需要考虑它们所提供的信息类型和检测灵敏度。下面详细解释这种差异的原因及应如何解读结果：检测灵敏度、结构信息的详细程度、环境效应。在检测样品结构比例时，圆二色谱（CD）由于其更高的灵敏度和对二级、三级结构的详细分析能力，通常被认为是更可

• • 重组蛋白怎么确定是不是膜蛋白

  确定重组蛋白是否为膜蛋白可以通过以下几种方法：氨基酸序列分析：跨膜域预测、信号肽识别；亚细胞定位实验：免疫荧光（Immunofluorescence）、GFP融合蛋白；生化分离和鉴定：膜分离实验、表面蛋白生物素化；功能实验：膜电位或离子通道活性测定、配体结合实验；蛋白质的理化性质：疏水性分析

• • 蛋白质跑双向电泳跑不出条带是什么原因？

  在分子生物学实验中，蛋白质电泳是一种常用的技术，用于分析蛋白质的分子量和电荷性质。然而，有时候在双向电泳中可能会出现蛋白质没有形成条带的情况，这可能有以下几种原因：试样处理不当、电泳条件不适、胶体材料问题、仪器问题、染色剂问题。

• • 请问如何确定N端是第几个氨基酸到第几个氨基酸啊，是自己决定的吗？

  确定蛋白质的N端（氨基端）具体氨基酸序列的位置，通常依据以下几个步骤：1、确定序列位置：N端序列指的是蛋白质或多肽链的第一个氨基酸起始的序列部分。通常情况下，N端从第一个氨基酸（即氨基酸序列中的第一个残基）开始。2、功能域或信号肽的识别：在特定情况下，例如功能域或信号肽的研究中，N端的定义可

• • 用CDPro和BESTSEL分析圆二色谱数据，得到的α螺旋值为0，β值很低，与文献不符。对于测试环节有何建议？

  在使用圆二色谱（CD）分析蛋白质二级结构时，出现计算结果与文献不符的情况，可能与多个因素有关。以下是一些建议，可以帮助你在测试环节中提高数据的准确性：一、样品制备和处理问题：1、可能是蛋白质样品在测量过程中已经部分或全部失活或者变性，这会导致CD光谱的变化。2、检查蛋白质溶液是否存在沉淀或者

• • 圆二色谱的结果用什么软件分析

  圆二色谱的结果分析可以使用多种软件，以下是一些常用的软件选项：CDPro是一个非常流行的圆二色谱数据分析软件包，包含三个主要的程序：CONTIN、SELCON3和CDSSTR。DichroWeb是一个在线的圆二色谱数据分析平台，用户可以将自己的圆二色谱数据上传至该平台并选择不同的分析方法（例

• • 请问如何制作用于检测蛋白质谱的小鼠肝脏样本？

  在制备用于检测蛋白质谱的小鼠肝脏样本时，我们需要以下材料和步骤。材料和设备：小鼠肝脏样本、冰冻研磨器、1.5ml的离心管、PBS (Phosphate Buffered Saline)、PMSF (Phenylmethanesulfonyl Fluoride) 蛋白酶抑制剂、BCA (Bic

• • 请问可以发一份交联法蛋白相互作用分析的protocol吗？

  交联法蛋白相互作用分析的具体步骤如下：1.样本准备：调整蛋白样品至适当浓度，一般为0.1至1 mg/mL，以保证交联效果。如果需要分析多个蛋白之间的相互作用，按一定比例将蛋白质混合。2.选择交联剂：选择适合的交联剂，如BS3或DSS，根据蛋白的特性和实验目的确定。确定交联剂的使用浓度，通常根

• • gcms固体怎么前处理，除了加内标，需要加氯化钠吗？

  在进行气相色谱质谱联用（Gas Chromatography-Mass Spectrometry, GCMS）分析前，固体样品需要经过适当的前处理，目的是提取并浓缩样品中需要分析的成分，同时去除可能干扰分析的杂质。具体的前处理步骤如下：粉碎，内标添加，溶剂提取，浓缩，衍生化处理。关于加入氯化