如果加了loading后，煮完准备跑wb发现有蓝色沉淀，这是loading加多了吗?

这种出现蓝色沉淀的现象，很可能是加了过量的Loading Buffer（上样缓冲液），尤其是含有Bromophenol Blue（溴酚蓝）和甘油/蔗糖的蓝色Loading Buffer。

 

可能原因分析：

1、Loading Buffer 加太多（浓度太高或体积比例不合适）

（1）Loading buffer 通常是5×或6×，加样时应按照 1:4（5×）或1:5（6×） 稀释；

（2）如果直接加原液或比例错误，甘油等组分会导致样本变稠或形成沉淀；

（3）蓝色沉淀多半是Bromophenol Blue 和 SDS 等在高浓度下析出。

 

2、蛋白浓度太高，与Buffer中的SDS反应沉淀

SDS可能与过多蛋白或杂质结合后形成不可溶复合物。

 

3、Buffer或样本没有充分混匀

尤其在低温（冰上）下加样，如果没充分混匀再煮，容易形成絮状沉淀。

 

4、煮样条件不当（时间太长/温度过高）

通常建议95°C，5分钟；煮太久可能导致SDS分解或蛋白聚集。

 

解决方案：

1、检查加样比例：确保 Loading Buffer 是按推荐比例稀释（如 1:4 或 1:5）；

2、重新混匀样品：轻轻涡旋混匀，确保样本均一；

3、重新煮样：避免过煮，控制在95°C，5 min；

4、离心去除沉淀：轻微离心几秒去除沉淀再上样，但注意可能损失蛋白。

 

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