用SDS-凝胶电泳法测定蛋白质分子量时，有哪些注意事项？

SDS-PAGE凝胶电泳法是测定蛋白质分子量最常用最简单的方法，其实验结果也容易受到多方面的影响，因此操作时也需要注意以下注意事项：

 

1.样品制备：

• 确保蛋白质完全变性：在样品中加入适量的SDS和减少剂（如β-mercaptoethanol或DTT）并在推荐的温度下加热一定时间，以确保蛋白质完全展开并断裂二硫键。
• 避免蛋白降解：确保使用新鲜的样品和缓冲液，并避免长时间存储。

 

2.凝胶的选择：

• 根据目标蛋白的分子量选择合适的凝胶浓度。例如，对于较高分子量的蛋白，使用低浓度的凝胶（如6-8%），而对于较低分子量的蛋白，使用高浓度的凝胶（如12-15%）。

 

3.标准蛋白质分子量标记：

• 使用合适范围的分子量标记，以便于与您的样品进行比较。
• 确保分子量标记是在与样品相同的条件下变性的。

 

4.电泳条件：

• 使用恒定的电流或电压，以确保电泳的稳定性。
• 避免过热：确保电泳槽有足够的散热和冷却。

 

5.染色和去染：

• 使用合适的染色方法，例如考马斯亮蓝、银染或其他特定的染色方法。
• 若使用背景去染步骤，注意避免过度去染。

 

6.分析：

• 使用适当的软件或工具来分析蛋白质条带的位置。
• 使用分子量标记来生成一个标准曲线，从而计算目标蛋白的分子量。

 

7.避免污染：

• 始终使用清洁的工具、管子和缓冲液。不要重复使用已经含有SDS或其他化学品的工具。

 

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