在做SDS-PAGE时候怎么算蛋白上样量？

确定上样量的目标是使得电泳后的蛋白质条带清晰可见，但又不至于过于集中导致条带模糊。

 

首先，你需要知道你的样品中蛋白质的浓度。这通常通过Bradford、BCA、Lowry等蛋白质浓度测定方法来实现。这些方法将提供一个蛋白质浓度的测量值，通常以微克/微升（µg/µl）为单位。一般来说，对于大部分的SDS-PAGE实验，每个样品孔的上样量通常在10-50微克之间。具体的上样量取决于你的实验目的和样品的性质。

 

一旦你确定了你的样品中蛋白质的浓度和你想要的上样量，你就可以计算出需要上样的体积。

 

公式是：上样体积（µl） = 上样量（µg） / 蛋白质浓度（µg/µl）。

 

在SDS-PAGE实验中，样品需要与上样缓冲液混合，然后在高温下煮沸以使蛋白质变性。因此，你需要考虑上样缓冲液的体积，以确保你的样品体积加上样品缓冲液的体积不会超过凝胶孔的容量。

 

下面通过一个具体例子来说明：

 

1.假设你的蛋白质浓度是2 µg/µl，你想要上样的量是20 µg，那么你需要上样的体积就是20 µg / 2 µg/µl = 10 µl。

 

2.如果你的上样缓冲液体积是5 µl，那么你的总上样体积就是10 µl + 5 µl = 15 µl，这个体积应该是可以容纳在你的凝胶孔中的。

 

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